『壹』 流式抗體如何選擇
第一看清楚抗的是你的目標蛋白質沒錯，目標蛋白的物種不要搞錯了，有些抗體對好幾個物種的目標蛋白有反應，對你的實驗有沒有影響。
第二抗體的物種是小鼠,大鼠,兔子還是什麼。雖然現在熒光都標記好了，一般不需要二抗。但最好還是選擇你有匹配二抗的一抗，以備不時之需。如果抗體還能夠做熒光染色啊，western blot啊用途多了更好。
第三熒光的顏色選擇一是你的流式儀一定要能讀，二是跟你需要counterstain的其他流式抗體錯開頻率。
第四抗體的球蛋白亞型。因為要根據這個選擇isotype對照用抗體。其實嚴格來說不光亞型一樣，濃度也要一樣，每個抗體分子攜帶的熒光分子數量也要一樣才行。最好是一個isotype你的好幾個抗體都能用，就省了事了。
第五到底能測試多少樣品。有些產品介紹沒說清楚，可以根據推薦的濃度計算一下。一是這樣才看出價格高低，二是根據自己需要選擇大支還是小支.買多了過期也是浪費。
當然也可以看看他們的克隆編號--有些文獻會討論某目標蛋白的各種抗體的特異性哪個好哪個壞，這都是使用者的經驗。但一般買抗體沒有人這么小心這么麻煩啦。
你還可以看製作抗體所用的抗原是什麼，有的是腫瘤組織提取液，有的是重組蛋白，有的是肽鏈片斷。選用哪個跟你的實驗用途有關。有些蛋白質有很多亞型，也要注意是否測試過跟那些亞型起反應。
一個非常重要的忘記說，就是單抗還是多抗。也要根據實驗性質選擇。搜到一篇不錯的文章談這個問題你看下吧。
『貳』 調查：大家用的一般是什麼牌子的流式抗體
eBioscience的抗體挺好用的，就是到貨時間比較慢。BD是老品牌，也是不錯的，但比前者貴了一丟丟~~~
『叄』 怎麼選擇各公司的流式抗體
一、如何搭配流式抗體熒游標記
流式抗體熒游標記搭配主要由3個因素決定的：流式細胞儀能檢測多少個通道、需要同時檢測檢測多少個指標、廠家的抗體有多少種熒游標記。如果流式細胞儀的通道越多，那麼同一份樣本能同時做的表面/胞內標志就越多
A、如何根據流式細胞儀搭配流式抗體
1）BD流式細胞儀（06版目錄第614頁）
流式細胞儀能檢測多少個通道是由有多少根激光決定的以及每根激光的功能決定的，所以首先需要注意兩點：
流式細胞儀有哪些激光。比如標配的FACSCalibur只有一根488nm的激光，能做FL1、FL2、FL3三個熒光通道/三個顏色，而選配的Calibur(FACSCalibur的簡稱)配有488nm和635nm兩根激光，可以檢測FL1-FL4四個通道/4個顏色。
不同型號的流式細胞儀的同樣的一個通道檢測熒光素的能力是不一樣的，比如Calibur的FL3（第3通道）能檢測PE-TexasRed,PE-Cy5,PerCP,PerCPCy5.5,PE-Cy7,而Aria的第3通道只能檢測PE-TexasRed,PE-Cy5,PerCP。Calibur第3通道能檢測的PerCP-Cy5.5在FACSAria上是第4通道檢測。Calibur和LSR都能檢測4個顏色，但是第4個通道檢測熒光素是不一樣的
搭配熒光素原則
搭配流式熒光素有2個原則：每個通道只能選擇1種熒光素；各個通道之間的熒光素可以隨意搭配，但需注意
1、每個通道只能選擇1種熒光素。以Calibur為例說明，Calibur的FL1通道選擇了FITC就不能選擇AlexaFluro488，或者選擇了AlexaFluro488就不能選FITCCalibur的FL3通道盡管能檢測PE-TexasRed,PE-Cy5,PerCP,PerCP-Cy5.5,PE-Cy7五個熒光素，但是我們我們搭配的時候只能選擇其中1個。
2、各個通道之間的熒光素可以隨意搭配：如果客戶的流式細胞儀能做4個通道，在第1個原則之下，那麼每個通道隨便選出1個熒光素就可以組合成4個顏色。以2跟激光的Calibur為例，Calibur各個熒光素之間可以搭配出16種組合。
比如常用的搭配是FITC(FL1)＋PE（FL2）＋PerCP（FL3）+APC(FL4),這個搭配組合可以更改成AlexFluro(FL1)＋PE（FL2）＋PerCP（FL3）+APC(FL4),或者FITC(FL1)＋PE（FL2）＋PerCP（FL3）+AlexFluro(FL4)，或者FITC(FL1)＋PE（FL2）＋PE-Cy5（FL3）+APC(FL4)等等。總之，在第1原則之下，我們可以隨意搭配和組合各個熒光素。但是需要注意的是，APC和PE-Cy5一起使用。
『肆』 如何選擇適合的流式抗體（五）：舉例
舉例一：BD流式儀器FACSCalibur試劑選擇及常見問題解答
一、如何搭配流式抗體熒游標記
流式抗體熒游標記搭配主要由3個因素決定的：流式細胞儀能檢測多少個通道、需要同時檢測檢測多少個指標、廠家的抗體有多少種熒游標記。如果流式細胞儀的通道越多，那麼同一份樣本能同時做的表面/胞內標志就越多
A、如何根據流式細胞儀搭配流式抗體
1）BD流式細胞儀（06版目錄第614頁）
流式細胞儀能檢測多少個通道是由有多少根激光決定的以及每根激光的功能決定的，所以首先需要注意兩點：
流式細胞儀有哪些激光。比如標配的FACSCalibur只有一根488nm的激光，能做FL1、FL2、FL3三個熒光通道/三個顏色，而選配的Calibur(FACSCalibur的簡稱)配有488nm和635nm兩根激光，可以檢測FL1-FL4四個通道/4個顏色。
不同型號的流式細胞儀的同樣的一個通道檢測熒光素的能力是不一樣的，比如Calibur的FL3（第3通道）能檢測PE-TexasRed,PE-Cy5,PerCP,PerCPCy5.5,PE-Cy7,而Aria的第3通道只能檢測PE-TexasRed,PE-Cy5,PerCP。Calibur第3通道能檢測的PerCP-Cy5.5在FACSAria上是第4通道檢測。Calibur和LSR都能檢測4個顏色，但是第4個通道檢測熒光素是不一樣的
搭配熒光素原則
搭配流式熒光素有2個原則：每個通道只能選擇1種熒光素；各個通道之間的熒光素可以隨意搭配，但需注意
1、每個通道只能選擇1種熒光素。以Calibur為例說明，Calibur的FL1通道選擇了FITC就不能選擇AlexaFluro488，或者選擇了AlexaFluro488就不能選FITCCalibur的FL3通道盡管能檢測PE-TexasRed,PE-Cy5,PerCP,PerCP-Cy5.5,PE-Cy7五個熒光素，但是我們我們搭配的時候只能選擇其中1個。
2、各個通道之間的熒光素可以隨意搭配：如果客戶的流式細胞儀能做4個通道，在第1個原則之下，那麼每個通道隨便選出1個熒光素就可以組合成4個顏色。以2跟激光的Calibur為例，Calibur各個熒光素之間可以搭配出16種組合。
比如常用的搭配是FITC(FL1)＋PE（FL2）＋PerCP（FL3）+APC(FL4),這個搭配組合可以更改成AlexFluro(FL1)＋PE（FL2）＋PerCP（FL3）+APC(FL4),或者FITC(FL1)＋PE（FL2）＋PerCP（FL3）+AlexFluro(FL4)，或者FITC(FL1)＋PE（FL2）＋PE-Cy5（FL3）+APC(FL4)等等。總之，在第1原則之下，我們可以隨意搭配和組合各個熒光素。但是需要注意的是，APC和PE-Cy5一起使用的話，上流式以後，容易導致補償過度
B、BD公司抗體有多少種熒光素
1）供應商能提供的每種抗體的熒光素是不一樣的我們需要根據同時結合供應商能提供的每種抗體的熒光素進行搭配。原則上同一個標志的不同的克隆號帶同1個熒光素在應用上沒有區別的，但是有些不同克隆號的抗體之間可能會有一些稍微的差異，需要仔細看說明書。我們可以盡量選擇在說明書上有流式圖形的抗體，或者選擇熒光素種類最多的克隆號的抗體
2）熒光素
可以登陸www.bdbiosciences.com/spetra，輸入熒光素和檢測的BD流式細胞儀機型及激發光，就可以查到相應的波長。
為什麼要推薦使用AlexFluro488和AlexFluro647呢？
因為這些熒光非常明亮，對激光非常穩定，適合流式細胞儀的光譜性質，對PH值不敏感，具有水溶性。此外，他們聯合使用時發射光譜存在巨大差異，無需補償。
C、如果檢測的指標數目超過了流式細胞儀的通道，怎麼辦？
如果需要做5個指標，而流式細胞儀只能做4個通道，首先將指標歸成2類，再將樣本分成2份，分別檢測。比如需要同時檢測CD3、CD4、CD8、IL-4和IFN-gamma，那麼將樣本分成兩份，第1份加CD3、CD4、CD8和IL-4，而第2份加CD3、CD4、CD8和IFN-gamma。
二、同型對照（IsotypyControl）
1、為什麼要用同型對照？
同型對照是使用與一抗相同種屬來源、相同亞型、相同劑量和相同的免疫球蛋白及亞型的免疫球蛋白，用於消除由於抗體非特異性與細胞結合而產生的背景染色。同型對照是真正意思上的陰性對照，它不但可以用來設定流式細胞儀的電壓，而且還可以幫忙省去昂貴與繁瑣的重組細胞因子競爭封閉步驟。在流式細胞儀上樣前，染色方式如下：
樣本管：一抗＋樣本
同型對照管：同型對照＋樣本
2、如何選擇同型對照？
一般選擇與一抗的成分完全相同種屬來源、相同亞型和亞鏈、相同熒游標記的抗體，比如抗人的CD56APC標記的抗體，貨號是555518,成份是MouseIgG1,κ。那麼它的同型對照應該是APC標記的MouseIgG1,κ，貨號是555751。注意同型對照的成份跟它的名稱是相同的.如果是抗體的組合形式是純化的一抗＋熒游標記的二抗，那麼應該選擇一抗的同型對照。比如CDw125的純化抗體，貨號是555901，成分是MouseIgG1,κ。它的同型對照是純化的MouseIgG1,κ，貨號是555746。它的二抗PE標記的抗小鼠IgG1,貨號是550083。那麼染色方式如下：
樣本管：純化的CDw25＋PE標記的抗MouseIgG1＋樣本
同型對照管：純化的同型對照＋PE標記的抗MouseIgG1＋樣本
如果沒有找到適合的同型對照，在保持來源相同、熒游標記相同、免疫球蛋白類別相同條件下，那麼優先選擇的順序應該是亞鏈不同－－亞型不同－－相同類別。比如，某種的抗體的來源是MouseIgG2а,κ。如果在同型對照表裡面找到不到完全相同的同型對照，那麼優先選擇相同熒游標記的MouseIgG2а為同型對照。如果也沒有找到MouseIgG2а，那麼優先選擇相同熒游標記的MouseIgG2b作為同型對照。如果最後還是沒有找到MouseIgG2b，那麼選者相同熒游標記的MouseIgG2作為同型對照。
3、如何查找同型對照？
同型對照在BD英文目錄中或者BD網站上跟它對照的抗體的位置是一致的。BD目錄中，抗人的抗體的同型對照都在HUMAN章節後面。抗小鼠的抗體的同型對照在MOUSE章節後面，非人類靈長類的抗體同型對照在NONHUMANPRIMATE章節後面。由於抗大鼠的抗體非常少，大部分抗體都是小鼠來源的，所以它的同型對照跟小鼠的一樣，放在MOUSE章節後面。胞內細胞因子、趨化因子、補體、炎症介質及其受體的同型對照放在其章節的後面（注意：人的胞內細胞因子的同型對照跟人的表面標志的同型對照是不在一起的）。Phosflow的同型對照在Phosflow的介紹後面。比如，比如抗人的CD56APC標記的抗體，貨號是555518，在06版BD目錄的169頁，成份是MouseIgG1,κ。那麼它的同型對照應該是在HUMAN章節中MouseImmunoglobulinIsotype表格中，第191頁，APC標記的MouseIgG1,κ，貨號是555751。
4、哪些客戶需要使用同型對照？
A對流式不是非常熟悉的客戶。
B做胞內流式客戶，比如胞內細胞因子、趨化因子和信號蛋白等。
C使用不常見的標志或者特異性不高的標志的客戶，因為客戶不熟悉不常見標志的表達情況，根據同型對照可以判斷陽性細胞的位置。一些特異性不高的抗體，如多抗，非特異性結合非常多，使用同型對照可排除假陽性。
D對流式非常熟悉又使用常用的表面標志的客戶一般可以不使用同型對照。
5、為什麼有時候同型對照的表達會比抗體的表達高？
首先需要檢查同型對照的抗體是否加錯類型、劑量等。其次，因為有些標志在細胞的表面或者胞內表達不高，而跟其類似的抗原非常多，那麼加入同型對照時，同型對照非特異性的結合會超過抗體的特異性，所以會造成這種現象，在細胞表面時如圖所示。這個時候推薦使用其他陰性對照，如空白對照等。
三、補償微球
流式細胞儀的熒光補償隔一段時間之後需要調整到適合的位置。如果熒光補償沒有調節好，會導致細胞分群不明顯或者流式檢測得到的結果圖非常不漂亮，而且會影響到檢測結果的不真實。熒光補償的調節對初學者來說非常不容易掌握，同時，補償調節是流式細胞術中比較難掌握的操作。尤其是一些不常見的標志檢測時，需要經驗非常豐富的流式操作者根據多年的經驗判斷調節補償，才可以得到比較好的數據和圖片。那麼，現在不需要這么麻煩。因為補償微球讓一切變得更簡單。BDCompBeads是專用於流式細胞儀多色分析的熒光補償調整微球。它的實用性是在於克服了以往普通的做三色以上的流式分析時補償難調、耗費樣本（往往用待測樣本單標來進行補償調節）的缺點。它本身不攜帶任何熒光，藉助於與客戶自己的特異性熒光抗體孵育結合來調節補償。它不但能象待測的樣本細胞一樣在同樣的實驗條件下固定、破膜等，操作起來很簡單，靈敏度高，一致性好，使補償更輕松更准確，而且最難得的是它最適合於多色分析（如五色、六色、七色等）和復合熒光素（如PE-Cy7、APC-Cy7等），因為這時的補償往往難度較大。各型號的流式儀器均能使用。Compbeads使用後可以將流式的條件保存，方便下次做同樣的熒光染色搭配時參考用。
『伍』 可否用流式抗體來做免疫熒光用
我覺得你是想用熒游標記的抗NGF/COX-2抗體來做直接染色，這樣的話可以在流式上試試。但是一般免疫熒光是用間接法，這樣的話熒光抗體只anti某個種屬的抗體（視一抗而定），不是anti NGF或COX-2的，這樣就不能用於流式了。
如果一個抗體可以用來「做western blot，免疫熒光，免疫共沉澱,ELISA」，我估計著是HRP或鹼性磷酸酶或生物素之類標記的，然後需要再加熒游標記的二抗，這類抗體也是不能做流式用的。
我只用過流式的抗體來做免疫熒光（直接染色），效果還不錯，但是反過來就沒試過。
『陸』 關於購買用於流式細胞技術的CD細胞抗體，有些地方看不懂
FITC 已經稀釋好的可以用100次，按說明書加即可。
Purified 是凍乾粉，需要自己買抗體稀釋液稀釋，但是價格相對便宜。
s/n 抗體稀釋液
『柒』 什麼是流式抗體
用於流式細胞儀檢測的抗體,與之相對應的有免疫組化抗體,免疫熒光抗體等等
『捌』 流式分析一定要用專門的直標抗體嗎
不一定能通用。你師姐用來做流式，是用直接標記，還是間接標記？如果是直接標記的話，那這個抗體一般不是FITC標記或者就是TRITC，PE之類的。如果恰好你的免疫組化，也是想用熒光素標記的抗體來直接標記，那就可以通用。如果你的免疫組化要用其它的標記的話，或者是間接標記的話，就有麻煩，因為熒光素的標記很可能會影響二抗和一抗的結合。
『玖』 流式抗體可以自己製作嗎
可以啊，類似標記FITC和Biotin之類的。但就算是CD4和CD8這樣這么常見的抗體，自行標記好，不僅使用的濃度需要比往常加倍，而且最後分群也沒有公司的抗體好。 但唯一的好處就是，自行製作標記太省錢了，可能平時買一次公司的抗體錢用來自己做標記的話，估計這些自製抗體可以用到實驗室關門了
『拾』 做流式細胞的抗體和做免疫組化需要的抗體是一樣的嗎
最好買寫了免疫組化的做
不然沒有信號
或者非特異性信號
你哪知道是抗體問題還是中間做的問題
而且做一次免疫組化還挺費事
要做就把東西准備好的