『壹』 氨苄抗性和卡那抗性載體哪個更穩定
必須帶有抗性。農桿菌裡面有輔助質粒,是使得菌株有抗性的。但不一定是利福平抗性,還有其他的。
『貳』 農桿菌本身有氨苄抗性嗎 謝謝 用氨苄抗性的載體轉化農桿菌總是染菌
首先確認下你的氨苄板子有沒有問題,會不會配置時間過長或者是由於曬了陽光等導致氨苄失效。
然後想想你的操作有沒有問題。
你轉化的農桿菌是否是商業化的感受態,如果是商業化的感受態,那一般不會有問題。
如果是你們自己的菌種,好像農桿菌的抗性很麻煩,有些菌種有不同的抗生素抗性甚至多種抗生素抗性,實在不行,就只能分離純化了。
『叄』 關於氨苄青黴素有效期的問題,屬於生物方面的培養基配置。
把培養基加熱到60-70℃,或不嚴格的話就再滅個菌,再重新加一次氨苄。養養一般的大腸桿菌是沒什麼問題的。
嚴格要求的話,像要用來做蛋白表達什麼的,就重新配吧~
『肆』 氨苄常溫放久了還能用么1001氨苄常溫放久了還能用么 - 百度
把培養基加熱到60-70℃,或不嚴格的話就再滅個菌,再重新加一次氨苄.養養一般的大腸桿菌是沒什麼問題的.
嚴格要求的話,像要用來做蛋白表達什麼的,就重新配吧~
『伍』 轉化的感受態有氨苄抗性但是提不出來質粒
這個問題可以從幾外方面著用排查,一個,氨苄是否失效?失一個廠家的或者批次的試一下。
細菌是否產生抗性?我不加質粒,直接用感受態塗板,看是否能長出來。
質粒提取是否出問題了?挑起菌落,去搖菌,而不是用菌落去提質粒。
最後,你是如何知道沒有質粒的?電泳檢測還是PCR檢測?如果電泳檢測,可能是質粒含量太低,檢測不出來(可以將提出來的質粒重新轉化一次,這樣會比連接產物的效率高)。如果是PCR檢測,一個是PCR系統是否正常?另一個,是否提出來的質粒並不是我們克隆進去的質粒(感受態細胞受到質粒污染了)。
『陸』 請問:做好的Amp平板放在冰箱里保存久了Amp會不會失效啊
不會,不過要看你的amp的有效期有多長,其實一般過了保質期問題也不大,有時候為了節約錢我也還在用,不過還是小心點好。
你在養什麼細菌啊,是不是養大腸桿菌要氨苄抗性的質粒啊。
請問你是哪個學校微生物實驗室的?
『柒』 氨苄青黴素抗性是什麼
恩,青黴菌等分泌的一種物質。使周圍的菌中對它有抗性的存活。沒抗性的死亡。有選擇性。
『捌』 氨苄抗性篩選的單菌落在含氨苄的液體培養基里為啥不長
我也遇到過這個問題,有兩種情況。
1、如果是出現在轉化後,則要看轉化後長出菌落的多少。若這個平板上密密麻麻都是菌落,有可能是氨苄失效或部分失效(畢竟要趁培養基未凝的時候倒平板,可能加入氨苄時溫度高了點;又或者是平板放存時間過久)。若平板上只是零星長了幾個菌落,則可以考慮是雜菌或活性不好的轉化菌。個人認為固體氨苄培養基的環境比液體氨苄培養基優越的多,這也是為什麼長時間凍存的菌會先劃平板活化一下的原因。
此時建議重新倒平板,或重新做連接轉化。
2、我還遇到過篩選出來的目的菌在冰箱凍存時間過久,復活時在平板上生長,但在液體培養基中繁殖極度緩慢,基本不長的情況。
後來,我用保存的質粒重新轉入了感受態細胞,解決了這個問題。
希望以上對你有所幫助。我覺得實驗中,找原因固然關鍵,但有時候重新做一次實驗更能解決問題。因為,很多不成功的結果是由偶發因素導致的。
『玖』 氨苄青黴素抗性基因作用是
氨苄青黴素抗性基因(Ampicillin resistance gene, ampr) 氨苄青黴素抗性基因是基因操作中使用最廣泛的選擇標記,絕大多數在大腸桿菌中克隆的質粒載體帶有該基因。青黴素可抑制細胞壁肽聚糖的合成,與有關的酶結合並抑制其活性,抑制轉肽反應。氨苄青黴素抗性基因編碼一個酶,該酶可分泌進入細菌的周質區,抑制轉肽反應並催化 β-內醯胺環水解,從而解除了氨苄青黴素的毒性。
『拾』 在Lb的培養基中加入氨苄後,一直放在室溫7天,氨苄抗性會消失。
氨苄放置37度的環境中的話,一般17~18個小時效果就不好了。
把培養基加熱到60-70℃,或不嚴格的話就再滅個菌,再重新加一次氨苄.養養一般的大腸桿菌是沒什麼問題的.
嚴格要求的話,像要用來做蛋白表達什麼的,就重新配吧~