⑴ 解释bd 尤其是b
其实你没注意到过程二,那很明显是细胞的衰老
⑵ 【求助】流式细胞仪检测细胞凋亡结果该怎样分析
已经做完流式,看来到结果却不源知该怎样分析了。我用的是AnnexinV-FITC 凋亡试剂盒 ,AnnexinV/PI双染检测细胞凋亡。请教各位,凋亡散点图中第1,2,4象限到底分别代表什么细胞?手里的资料说法都不相同。试剂盒说明书:1代表细胞收集过程中机械性损伤的细胞,2 代表继发性坏死细胞,4代表凋亡细胞。有资料说:1代表坏死细胞,2代表晚期凋亡细胞,4代表早期凋亡细胞。我就不明白了,既然是凋亡,就算是晚期,细胞膜也会破坏?还有的认为,2象限代表晚期凋亡和继发性坏死的细胞。 我用的是美国Beckman-Coulter公司试剂盒,它的说明说上就是这么写的: Quadrant 3:viable cells Quadrant 4:apoptotic cells Quadrant 2:secondary necrotic cells 这种说法在园子里还没见过。 应该以说明书为准吗?我很迷茫。请您指点。
⑶ 请教ANNEXIN V-PI法检测凋亡的原理和相关试剂盒使用步骤
Annexin V-FITC/PI细胞凋亡检测试剂盒( V-FITC/PI Apoptosis Detection Kit)是用FITC标记了的Annexin V作为探针,来检测细胞早期凋亡的发生,可用荧光显微镜、流式细胞仪或其他荧光检测设备进行检测。
其检测原理为:在正常的活细胞中,磷脂酰丝氨酸(phosphotidylserine,PS)位于细胞膜的内侧,但在早期凋亡的细胞中,PS 从细胞膜的内侧翻转到细胞膜的表面,暴露在细胞外环境中。Annexin-Ⅴ(膜联蛋白-V)是一种分子量为35-36KD的Ca2+ 依赖性磷脂结合蛋白,能与PS高亲和力结合。可通过细胞外侧暴露的磷脂酰丝氨酸与凋亡早期细胞的胞膜结合。
操作步骤:
1. 从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条,剩余板条用自封袋密封放回4℃。
2. 设置标准品孔和样本孔,标准品孔各加不同浓度的标准品50μL;
3. 样本孔中加入待测样本50μL;空白孔不加。
4. 除空白孔外,标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的检测抗体100μL,用封板膜封住反应孔,37℃水浴锅或恒温箱温育60min。
5. 弃去液体,吸水纸上拍干,每孔加满洗涤液(350μL),静置1min,甩去洗涤液,吸水纸上拍干,如此重复洗板5次(也可用洗板机洗板)。
6. 每孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min。
7. 每孔加入终止液50μL,15min内,在450nm波长处测定各孔的OD值。
⑷ 求TUNEL细胞凋亡检测试剂盒(FITC)使用说明书,我买的是absin品牌的。
absin网站就有FITC试剂盒使用说明书的,你去他家网站搜索这个试剂盒,在他们产品页面上就有下载。
⑸ TUNEL细胞凋亡试剂盒说明书(罗氏、Promega中文版说明书等)及其实验步骤
http://www.promega.com.cn/techserv/ctbs/G3250TNUELFluo.pdf
⑹ 贝克曼gallios流式细胞仪做凋亡和周期,可以用BD公司的试剂盒吗
当然可以。试剂盒不限于本公司的机器,只要试剂盒内的荧光素在所用机器的可检测波长范围就可以了。
⑺ 满病毒转染后带绿色荧光的待检细胞要去做流式,测凋亡,应该用什么凋亡试剂盒呢
转染了GFP的细胞不能用FITC标记的Annexin V,因为FITC和GFP在流式细胞仪上是同一通道检测,无法区分,必回须选用其他荧光素标记的答Annexin V,比如APC、PE等。BD的凋亡检测试剂盒不错。
⑻ 凋亡双染检测试剂盒指的是什么
细胞凋亡是细胞的基本特征之一,它在机体的胚胎发育、组织修复、内环境的稳专定等方属面起着十分重要的作用。在正常细胞中,磷脂酰丝氨酸(PS)只分布在细胞膜脂质双层的内侧,而在细胞凋亡早期,细胞膜中的磷脂酰丝氨酸(PS)由脂膜内侧翻向外侧。AnnexinⅤ是一种分子量为35-36kD的Ca2+依赖性磷脂结合蛋白,能与细胞凋亡过程中翻转到膜外的PS高亲和力特异性结合。
用标记了FITC的AnnexinⅤ作为荧光探针,利用流式细胞仪或荧光显微镜可检测细胞凋亡的发生,正常细胞和早期凋亡细胞的细胞膜是完整的。Propidium iodide(PI)是一种核酸染料,它不能透过完整的细胞膜,但在凋亡中晚期的细胞和死细胞,PI能够透过细胞膜与细胞核结合呈现红色。将AnnexinⅤ与PI匹配使用,可以将凋亡早期的细胞和晚期的细胞以及死细胞区分开来。
⑼ bd的流式细胞仪器测凋亡怎么操作
检测凋抄亡的流式方法很多,袭就算是BD的机子,型号也很多,所以操作差别很大。不过原则都是一样的。先用未染色的细胞设置gate,然后根据染色的强弱,来判断凋亡的多少
以下是目前常用的流式细胞仪检测凋亡的方法,你根据自己试验细胞的不同来选取:
⑽ 第十一题的BD选项求解释
B 被病原体感染的细胞的清除是细胞凋亡,和免疫系统的自身稳定功能
D 细胞分裂时,DNA是进行复制的,遗传物质有变化过程