① ,分离胶中的TEMED和AP的作用是什么
过硫酸铵(AP)为催化剂,四甲基乙二胺(TEMED)为加速剂,在聚合过程中,TEMED催化过硫酸铵产生自由基,后者引发丙烯酰胺单体聚合,同时甲叉双丙烯酰胺与丙烯酰胺链间产生甲叉键交联,从而形成三维网状结构。
AP是过硫酸铵,用于产生自由基,自由基引发丙烯酰胺聚合;TEMED是N,N,N',N'-四甲基乙二胺,用于催化APS产生自由基。
(1)temed试剂有效期扩展阅读:
化学工业用作制造过硫酸盐和双氧水的原料,有机高分子聚合时的助聚剂、氯乙烯单体聚合时的引发剂。油脂、肥皂业用作漂白剂。还用于金属板蚀割时的腐蚀剂及石油工业采油等方面。食品级用作小麦改质剂、啤酒酵母防霉剂。
用作醋酸乙烯、丙烯酸酯等烯类单体乳液聚合的引发剂,价格便宜,所得乳液耐水性较好。还用作脲醛树脂的固化剂,固化速度最快。亦用作淀粉胶黏剂的助氧化剂,与淀粉成分中的蛋白质反应提高粘接性,参考用量为淀粉的0.2%~0.4%。也用作金属铜表面处理剂。
② PC材料都不耐哪些化学试剂啊,怎么解决
PC(聚碳酸酯)缺点:不耐强酸,不耐强碱,不耐紫外线,耐弱酸,耐中性油。 所以强酸碱性的应该就不行。
③ SDS电泳里的试剂分别是什么作用
聚丙烯酰胺的作用:丙烯酰胺与为蛋白质电泳提供载体,其凝固的好坏直接关系到电泳成功与否,与促凝剂及环境密切相关;
制胶缓冲液:浓缩胶选择pH6.7,分离胶选择pH8.9,选择tris-HCL系统,具体作用后面介绍;
TEMED与AP:促凝作用,加速聚丙烯酰胺的凝固;
十二烷基硫酸钠(SDS):阳离子去污剂,作用有四:去蛋白质电荷、解离蛋白质之间的氢键、取消蛋白分子内的疏水作用、去多肽折叠。
④ TEMED到底是什么
TEMED即N,N,N',N'-Tetramethylethylenediamine,
中文名:N,N,N',N'-四甲基乙二胺。
分子式:(CH3)2NCH2CH2N(CH3)2,分子量为116.20。
外观:无色透明液体。
气味:微腥臭味。
熔点:-55℃
沸点:120-122℃
密度:0.775g/ml(20℃)
用途:多用于生物分子实验室当中,用于配制SDS-PAGE胶。TEMED可以催化APS产生自由基,从而加速丙烯酰胺凝胶的聚合,可作为一种促凝剂使用
⑤ temed打翻了怎么办
通常情况下,实验室常用的生物、化学试剂都带有一定的毒性,从职业健康角度来讲,大家在实验操作过程中应注意做好防护措施,以免危害人身安全。身体是革命的本钱,老拿生命做实验,实在不值得!
来了解一下,生物、化学实验室中常用到的一些有毒物质吧!
1. DNA电泳与溴化乙锭
“DNA的琼脂糖凝胶电泳”是生物化学实验必开的基础型实验。“质粒DNA的分离、纯化和鉴定”在很多学校也是必开的综合性实验。1也。。这些涉及到DNA的提纯及鉴定的实验都会用到高度灵敏的荧光染色剂溴化乙锭(Ethidium bromide,EB)对DNA进行染色。EB是强诱变剂,具有高致癌性,会在60~70 cc蒸发,所以在学生实验中要特别注意其安全使用,严禁随便丢弃。在实验中使用及实验结束后处理应注意以下事项。
使用中注意事项
实验室涉及到EB的操作应统一固定在实验室的某一角落,称量固体时要带面罩和手套,使用含有EB的溶液务必带上手套。同时要告诉学生不要在胶太热的时候加EB,以防止因蒸发被吸入。接触到EB的玻璃器皿应集中放置并专门使用,污染到EB的枪头、抹布、手套及EB染色跑完的胶,回收至棕色的玻璃瓶中,定期进行焚烧处理旧o。桌面或物体表面污染到EB时,可用活性碳进行处理。
废EB溶液处理
(1)EB浓溶液(浓度大于0.5 mg/mI)的净化处理
先将EB溶液用水稀释至浓度低于0.5 mg/mI,加人1倍体积的5%次高锰酸钾,小心混匀后再加1倍体积的2.5 moL/L盐酸。小心混匀,于室温放置数小时;加入l倍体积的2.5 mol/L氢氧化钠,小心混匀后可丢弃该溶液,统一处理。
(2)EB稀溶液(浓度小于0.5 mg/mI)的净化处理按1 mg/mL的量加入活性炭,不时轻摇混匀,室温放置1 h;用whatman l号滤纸过滤溶液,丢弃滤液并将活性碳与滤纸密封后丢弃,统一处理。
现在已有替代EB的核酸染料,如sYBR Green核酸染料"1,它耐高温,可以在化胶时加入;Gold—ViewTM核酸染料使用方法与EB完全相同,在紫外透射光下双链DNA呈现绿色荧EB替代试剂光,而单链DNA呈红色荧光。这些新型核酸染料虽然比EB毒性低,但价格高,灵敏度目前比不上EB,有条件的实验室可以考虑替代EB使用。
2. 聚丙烯酰胺凝胶电泳与有毒、有害物质
聚丙烯酰胺凝胶电泳在生物化学实验中是常用的实验手段,涉及到蛋白质分离纯化及鉴定、蛋白质分子量及等电点测定的实验都会使用到该电泳方法,如“聚丙烯酰胺凝胶电泳分离蛋白质”、“SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定蛋白质的相对分子量”、“聚丙烯酰胺凝胶等电聚焦法测定蛋白质等电点”等常开设的基础实验。在聚丙烯酰胺凝胶制备过程中用到以下有毒、有害物质:
丙烯酰胺
丙烯酰胺具有很强的神经毒性,同时还有生殖、发育毒性。神经毒性作用表现为周围神经退行性变化和脑中涉及学习、记忆和其他认知功能部位的退行性变化。实验还显示丙烯酰胺是一种可能致癌物。丙烯酰胺可通过皮肤吸收及呼吸道进入人体,且累积毒性,不容易排毒。因此,称量固体丙烯酰胺粉末和处理它们的溶液时必须戴手套和口罩。当丙烯酰胺聚合为聚丙烯酰胺凝胶时则为无毒的,但操作时仍要小心,凝胶内可能有少量未聚合的丙烯酰胺。
甲叉双丙烯酰胺
甲叉双丙烯酰胺是丙烯酰胺形成凝胶的交联剂,因有取代基丙烯酰胺,因此具有一定的毒性,能轻微刺激眼睛、皮肤和粘膜。称量固体粉末和处理它们的溶液时需戴手套和口罩,应避免与人体长时间直接接触,误碰触时应用清水洗净。
TEMED
TEMED是形成凝胶反应所用的加速剂,也具有强神经毒性,应防止误吸,操作时快速,存放时密封。
过硫酸铵
过硫酸铵是丙烯酰胺与甲叉双丙烯酰胺进行化学聚合的引发剂,对黏膜和上呼吸道组织、眼睛和皮肤有极大危害性。吸人可致命。操作时需戴合适的手套、安全眼镜和面罩,始终在通风橱里操作,操作完后彻底洗手。
十二烷基硫酸钠(SDS)
SDS是·种阴离子表面活性剂,与蛋白形成复合物,用于测定蛋白质分子量。SDS有毒,是一种刺激物,能对眼睛造成严重损伤,可因吸入、咽下或皮肤吸收而损害健康。称量及配溶液时不要吸人其粉末,需戴合适的手套、面罩和护目镜。
巯基乙醇
它在测定蛋白质分子量时用于处理样品,吸入、摄人或经皮肤吸收后会中毒。其中毒表现有紫绀、呕吐、震颤、头痛、惊厥、昏迷,甚至死亡;对眼、皮肤有强烈刺激性;对环境有危害;对水体可造成污染。应在通风橱里操作,佩戴面罩,戴乳胶手套。
3. RNA提取与有毒、有害溶剂
“动物肝脏RNA的制备和纯度测定”是生物化学实验课中必开的基础实验,RNA的提取过程需要用到溶剂去除蛋白质,这些溶剂对人体具有一定的毒性。
氯仿
它对皮肤、眼睛、黏膜和呼吸道有刺激作用,是一种致癌剂,可损害肝和肾。它也易挥发,应避免吸入挥发的气体;操作时需戴合适的手套和安全眼镜并始终在化学通风橱里进行。
⑥ SDS-PAGE凝胶制实验及其各实验试剂的配制方法
SDS-PAGE凝胶制备属于实验室最常规的操作了,刚开始做蛋白实验总是在找凝胶配制实验中所用试剂的配方,这里总结了分离胶、浓缩胶、分离胶和浓缩胶缓冲液、考马斯亮蓝染液、样品缓冲液、电泳缓冲液等配方。
1.
分离胶(12%)
配制
所需试剂
所需体积
分离胶(12%)
30%丙烯酰胺
6.0
ml
1.5
mol/l
Tris-HCl
3.8
ml
10%SDS
150
μl
10%过硫酸铵
150
μl
TEMED
6
μl
蒸馏水
4.9
ml
2.
浓缩胶(5%)
配制
所需试剂
所需体积
浓缩胶(5%)
30%丙烯酰胺
1.3
ml
1.5
mol/l
Tris-HCl
1.0
ml
10%SDS
80
μl
10%过硫酸铵
80
μl
TEMED
8
μl
蒸馏水
5.5
ml
3.
分离胶缓冲液(pH8.9)
配制
所需试剂
所需体积
分离胶缓冲液
Tris
36.6
g
1
mol/l
HCl
48
ml
蒸馏水
补足至100
ml
4.
浓缩胶缓冲液(pH6.7)
配制
所需试剂
所需体积
浓缩胶缓冲液(pH6.7)
Tris
5.98
g
1
mol/l
HCl
48
ml
蒸馏水
补足至100
ml
5.
30%丙烯酰胺(pH≤7.0)
配制
所需试剂
所需体积
30%丙烯酰胺(pH≤7.0)
丙烯酰胺
29
g
甲叉-双丙烯酰胺
1
g
蒸馏水
补足至100
ml
6.
10%过硫酸铵(W/V):1g过硫酸铵溶于10ml水中,4℃保存数周,尽量现用现配。
7.
10%SDS:将10
g
SDS溶于80ml重蒸水中并轻缓搅拌(室温低时需水浴加热溶解),再定容至100ml,室温存放。
8.
样品缓冲液
配制
所需试剂
所需体积
样品缓冲液
1
M
Tris-HCl(pH6.7)
5
ml
SDS
2.5
g
巯基乙醇
1
ml
溴酚兰
0.05
g
蔗糖
10
g
蒸馏水
补足至100ml
9.
考马斯亮蓝染色液:0.25g考马斯亮蓝R-250用少量甲醇溶解后,用甲醇(40ml)-乙酸(10ml)水溶液稀释至100ml。
10.
Tris-甘氨酸电泳缓冲液(pH8.3)
配制
所需试剂
所需体积
Tris-甘氨酸
电泳缓冲液(pH8.3)
Tris碱
15.1
g
甘氨酸
94
g
10%(W/V)SDS
50
ml
去离子水
补足至100
ml
凝胶配制所需试剂的母液不能放置太久,有条件的实验室可将母液保存在4度冰箱中,放置母液被微生物污染或者出现沉淀。
⑦ 为何新配的各种溶液,而SDS-PAGE电泳分离胶不凝固
如果试剂没用错,检查APS和TEMED是否过期,APS保质期只有几天,APS和REMED加入的量的不够,凝胶过程很慢;气温太低,凝固也很慢。
⑧ SDS电泳里的试剂分别是什么作用在SDS电泳
SDS电泳里的试剂分别是什么作用在SDS电泳
聚丙烯酰胺的作用:丙烯酰胺与为蛋白质电泳提供载体,其凝固的好坏直接关系到电泳成功与否,与促凝剂及环境密切相关;
制胶缓冲液:浓缩胶选择pH6.7,分离胶选择pH8.9,选择tris-HCL系统,具体作用后面介绍;
TEMED与AP:促凝作用,加速聚丙烯酰胺的凝固;
十二烷基硫酸钠(SDS):阳离子去污剂,作用有四:去蛋白质电荷、解离蛋白质之间的氢键、取消蛋白分子内的疏水作用、去多肽折叠.