❶ 利用Mehlich3（M3）法，怎样测定土壤浸出液中的有效磷
答：试剂配制
（1）钼锑抗试剂
称取酒石酸锑钾［K（SbO）C4H4O6·1/2H2O，分析纯］0.5克溶于100毫升去离子水中，配制成0.5%的溶液。另称取钼酸铵［（NH4）6Mo7O24·4H2O，Z分析纯］10.0克溶于450毫升水中，慢慢地加入153毫升浓硫酸（分析纯），边加边搅动。再将100毫升0.5%的酒石酸锑钾溶液加入钼酸铵溶液中，最后加水至1000毫升，充分摇匀，贮存于棕色瓶中，此为钼锑贮备液。
在临用前（当天），称取抗坏血酸（即维生素C，分析纯）7.5克，溶于500毫升钼锑贮备液中，混匀此为钼锑抗试剂，有效期24小时，如保存在冰箱中则有效期更长。上试剂中硫酸的浓度为5.5摩尔/升（1/2H2SO4），钼酸铵为1%，酒石酸锑钾为0.05%，抗坏血酸为1.5%。此溶液可供100样次（方法一）或250样次（方法二）使用。
（2）磷工作液［ρ（P）=5毫克/升］
称取磷酸二氢钾（KH2PO4，分析纯，105℃烘干2小时）0.2195克，置于400毫升去离子水中，加入浓硫酸5毫升（防长霉菌，可使溶液长期保存），转入1000毫升容量瓶中，用水定容。此溶液为50毫克/升磷标准溶液。准确吸取此贮备液25毫升，稀释至250毫升，即为5毫克/升磷标液（此溶液不宜久存）。
测定步骤 以下两种方法任选其一。
方法一：用移液管或加样枪准确吸取2.00～10.00毫升土壤浸出液（依肥力水平而异）于50毫升容量瓶中，加水至约30毫升，加入5.00毫升钼锑抗试剂显色，定容摇匀［注释5］。显色30分钟后，在880纳米处比色。如冬季气温较低时，注意保持显色时温度在15℃以上，最好在恒温室内显色，以加快显色速度。测定的同时做空白校正［注释6］。
方法二：用加样枪准确吸取1.00毫升土壤浸出液于50毫升塑料瓶中，用溶液分配器准确加水17.0毫升，再用加样枪准确加入2.00毫升钼锑抗试剂显色，摇匀，显色30分钟后，在880纳米处比色。冬季气温低时，保温措施同方法一。测定的同时做空白试验校正。该法速度快，浸出试液用量少，试剂用量也少，计算简单。
工作曲线：准确吸取5毫克/升 P标准溶液0、0.5、1.00、2.00、4.00、6.00毫升，分别放入50毫升容量瓶中，加水至约30毫升，加入5.00毫升钼锑抗试剂显色，定容摇匀，即得0、0.05、0.1、0.2、0.4、0.6毫克/升 P标准系列溶液。显色30分钟后，在880纳米处比色。
结果计算
方法一：土壤M3-P ω（P）=ρ（P）×V×D/m
式中：ω（P）——土壤有效磷（M3-P）的质量分数（毫克/千克）；
ρ（P）——待测液中P浓度（毫克/升）；
V——显色液体积（毫升）；
D——分取倍数，浸出液体积/吸取滤液体积；
M——风干土样质量（克）。
方法二：简化计算公式为
ω（P）=ρ（P）×200
❷ 测定速效磷过滤时溶液发黄是怎么回事
1—4土壤中氮的测定(全氮、速效氮)1—4.1土壤全氮量的测定(重铬酸钾—硫酸消化法)。土壤含氮量的多少及其存在状态，常与作物的产量在某一条件下有一定的正相关，从目前我国土壤肥力状况看，80%左右的土壤都缺乏氮素。因此，了解土壤全氮量，可作为施肥的参考，以便指导施肥达到增产效果。方法原理土壤与浓硫酸及还原性催化剂共同加热，使有机氮转化成氨，并与硫酸结合成硫酸铵；无机的铵态氮转化成硫酸铵；极微量的硝态氮在加热过程中逸出损失；有机质氧化成CO2。样品消化后，再用浓碱蒸馏，使硫酸铵转化成氨逸出，并被硼酸所吸收，最后用标准酸滴定。主要反应可用下列方程式表示：NH2·CH2CO·NH-CH2COOH+H2SO4=2NH2-CH2COOH+SO2+［O］NH2-CH2COOH+3H2SO4=NH3+2CO2↑+3SO2↑+4H2O2NH2-CH2COOH+2K2Cr2O7+9H2SO4=(NH4)2SO4+2K2SO4+2Cr2(SO4)3+4CO2↑+10H2O(NH4)2SO4＋2NaOH=Na2SO4+2H2O+2NH3↑NH3+H3BO3=H3BO3·NH3H3BO3·NH3+HCl=H3BO3+NH4Cl操作步骤1.在分析天平上称取通过60号筛(孔径为0.25mm)的风干土壤样品0.5—1g(精确到0.001g)，然后放入150ml开氏瓶中。2.加浓硫酸(H2SO4)5ml，并在瓶口加一只弯颈小漏斗，然后放在调温电炉上高温消煮15分钟左右，使硫酸大量冒烟，当看不到黑色碳粒存在时即可(如果有机质含量超过5%时，应加1—2g焦硫酸钾，以提高温度加强硫酸的氧化能力)。3.待冷却后，加5ml饱和重铬酸钾溶液，在电炉上微沸5分钟，这时切勿使硫酸发烟。4.消化结束后，在开氏瓶中加蒸馏水或不含氮的自来水70ml，摇匀后接在蒸馏装置上，再用筒形漏斗通过Y形管缓缓加入40%氢氧化钠(NaOH)25ml。5.将一三角瓶接在冷凝管的下端，并使冷凝管浸在三角瓶的液面下，三角瓶内盛有25ml2%硼酸吸收液和定氮混合指示剂1滴。6.将螺丝夹打开(蒸汽发生器内的水要预先加热至沸)，通入蒸汽，并打开电炉和通自来水冷凝。7.蒸馏20分钟后，检查蒸馏是否完全。检查方法：取出三角瓶，在冷凝管下端取1滴蒸出液于白色瓷板上，加纳氏试剂1滴，如无黄色出现，即表示蒸馏完全，否则应继续蒸馏，直到蒸馏完全为止(或用红色石蕊试纸检验)。8.蒸馏完全后，降低三角瓶的位置，使冷凝管的下端离开液面，用少量蒸馏水冲洗冷凝的管的下端(洗入三角瓶中)，然后用0.02mol/L盐酸(HCl)标准液滴定，溶液由蓝色变为酒红色时即为终点。记下消耗标准盐酸的毫升数。测定时同时要做空白试验，除不加试样外，其它操作相同。结果计算N%=[(V-V0)×N×0.014]／样品重×100式中：V—滴定时消耗标准盐酸的毫升数；V0—滴定空白时消耗标准盐酸的毫升数；N—标准盐酸的摩尔浓度；0.014—氮原子的毫摩尔质量g/mmol；100—换算成百分数。注意事项1.在使用蒸馏装置前，要先空蒸5分钟左右，把蒸汽发生器及蒸馏系统中可能存在的含氮杂质去除干净，并用纳氏试剂检查。2.样品经浓硫酸消煮后须充分冷却，然后再加饱和重铬酸钾溶液，否则作用非常激烈，易使样品溅出。加入重铬酸钾后，如果溶液出现绿色，或消化1—2分钟后即变绿色，这说明重铬酸钾量不足，在这种情况下，可补加1g固体重铬酸钾(K2Cr2O7)，然后继续消化。3.若蒸馏产生倒吸现象，可再补加硼酸吸收液，仍可继续蒸馏。4.在蒸馏过程中必须冷凝充分，否则会使吸收液发热，使氨因受热而挥发，影响测定结果。5.蒸馏时不要使开氏瓶内温度太低，使蒸气充足，否则易出现倒吸现象。另外，在实验结束时要先取下三角瓶，然后停止加热，或降低三角瓶使冷凝管下端离开液面。仪器、试剂1.主要仪器：开氏瓶(150ml)、弯颈小漏斗、分析天平、电炉、普通定氮蒸馏装置。2.试剂：(1)浓硫酸(化学纯，比重1.84)。(2)饱和重铬酸钾溶液。称取200g(化学纯)重铬酸钾溶于1000ml热蒸馏水中。(3)40%氢氧化钠(NaOH)溶液。称取工业用氢氧化钠(NaOH)400g，加水溶解不断搅拌，再稀释定容至1000ml贮于塑料瓶中。(4)2%硼酸溶液。称取20g硼酸加入热蒸馏水(60℃)溶解，冷却后稀释定容至1000ml，最后用稀盐酸(HCl)或稀氢氧化钠(NaOH)调节pH至4.5(定氮混合指示剂显葡萄酒红色)。(5)定氮混合指示剂。称取0.1g甲基红和0.5g溴甲酚绿指示剂放入玛瑙研钵中，加入100ml95%酒精研磨溶解，此液应用稀盐酸(HCl)或氢氧化钠(NaOH)调节pH至4.5。(6)0.02mol/L盐酸标准溶液。取浓盐酸(HCl)(比重1.19)1.67ml，用蒸馏水稀释定容至1000ml，然后用标准碱液或硼砂标定。(7)钠氏试剂(定性检查用)。称氢氧化钾(KOH)134g溶于460ml蒸馏水中；称取碘化钾(KI)20g溶于50ml蒸馏水中，加碘化汞(HgI)使溶液至饱和状态(大约32g左右)。然后将以上两种溶液混合即成。1—4.2土壤水解性氮的测定(碱解扩散法)土壤水解性氮，包括矿质态氮和有机态氮中比较易于分解的部分。其测定结果与作物氮素吸收有较好的相关性。测定土壤中水解性氮的变化动态，能及时了解土壤肥力，指导施肥。测定原理在密封的扩散皿中，用1.8mol/L氢氧化钠(NaOH)溶液水解土壤样品，在恒温条件下使有效氮碱解转化为氨气状态，并不断地扩散逸出，由硼酸(H3BO3)吸收，再用标准盐酸滴定，计算出土壤水解性氮的含量。旱地土壤硝态氮含量较高，需加硫酸亚铁使之还原成铵态氮。由于硫酸亚铁本身会中和部分氢氧化钠，故需提高碱的浓度(1.8mol/L，使碱保持1.2mol/L的浓度)。水稻土壤中硝态氮含量极微，可以省去加硫酸亚铁，直接用1.2mol/L氢氧化钠水解。操作步骤1.称取通过18号筛(孔径1mm)风干样品2g(精确到0.001g)和1g硫酸亚铁粉剂，均匀铺在扩散皿外室内，水平地轻轻旋转扩散皿，使样品铺平。(水稻土样品则不必加硫酸亚铁。)2.用吸管吸取2%硼酸溶液2ml，加入扩散皿内室，并滴加1滴定氮混合指示剂，然后在皿的外室边缘涂上特制胶水，盖上毛玻璃，并旋转数次，以便毛玻璃与皿边完全粘合，再慢慢转开毛玻璃的一边，使扩散皿露出一条狭缝，迅速用移液管加入10ml1.8mol/L氢氧化钠于皿的外室(水稻土样品则加入10ml1.2mol/L氢氧化钠)，立即用毛玻璃盖严。3.水平轻轻旋转扩散皿，使碱溶液与土壤充分混合均匀，用橡皮筋固定，贴上标签，随后放入40℃恒温箱中。24小时后取出，再以0.01mol/LHCl标准溶液用微量滴定管滴定内室所吸收的氮量，溶液由蓝色滴至微红色为终点，记下盐酸用量毫升数V。同时要做空白试验，滴定所用盐酸量为V0。结果计算水解性氮(mg/100g土)=N×(V-V0)×14／样品重×100式中：N—标准盐酸的摩尔浓度；V—滴定样品时所用去的盐酸的毫升数；V0—空白试验所消耗的标准盐酸的毫升数；14—一个氮原子的摩尔质量mg/mol；100—换算成每百克样品中氮的毫克数。注意事项(1)滴定前首先要检查滴定管的下端是否充有气泡。若有，首先要把气泡排出。(2)滴定时，标准酸要逐滴加入，在接近终点时，用玻璃棒从滴定管尖端沾取少量标准酸滴入扩散皿内。(3)特制胶水一定不能沾污到内室，否则测定结果将会偏高。(4)扩散皿在抹有特制胶水后必须盖严，以防漏气。主要仪器扩散皿、微量滴定管、1/1000分析天平、恒温箱、玻璃棒毛玻璃、皮筋、吸管(2ml和10ml)，腊光纸、角匙、瓷盘。试剂(1)1.8mol/L氢氧化钠溶液。称取化学纯氢氧化钠72g，用蒸馏水溶解后冷却定容到1000ml。(2)1.2mol/L氢氧化钠溶液。称取化学纯氢氧化钠48g,用蒸馏水溶解定容到1000ml。(3)2%硼酸溶液。称取20g硼酸，用热蒸馏水(约60℃)溶解，冷却后稀释至1000ml，用稀盐酸或稀氢氧化钠调节pH至4.5(定氮混合指示剂显葡萄酒红色)。(4)0.01mol/L盐酸标准溶液。先配制1.0mol/L盐酸溶液，然后稀释100倍，用标准碱标定。(5)定氮混合指示剂。与土壤全氮的测定配法相同。(6)特制胶水。阿拉伯胶(称取10g粉状阿拉伯胶，溶于15ml蒸馏水中)10份、甘油10份，饱和碳酸钾5份混合即成(最好放置在盛有浓硫酸的干燥器中以除去氨)。(7)硫酸亚铁(粉状)。将分析纯硫酸亚铁磨细保存于阴凉干燥处。1—5土壤中磷的测定(全磷、速效磷)1—5.1土壤全磷的测定(硫酸一高氯酸消煮法)方法原理在高温条件下，土壤中含磷矿物及有机磷化合物与高沸点的硫酸和强氧化剂高氯酸作用，使之完全分解，全部转化为正磷酸盐而进入溶液，然后用钼锑抗比色法测定。操作步骤1.在分析天平上准确称取通过100目筛(孔径为0.25mm)的土壤样品1g(精确到0.0001)置于50ml三角瓶中，以少量水湿润，并加入浓H2SO48ml，摇动后(最好放置过夜)再加入70—72%的高氯酸(HClO4)10滴摇匀。2.于瓶口上放一小漏斗，置于电炉上加热消煮至瓶内溶液开始转白后，继续消煮20分钟，全部消煮时间约为45—60分钟。3.将冷却后的消煮液用水小心地洗入100ml容量瓶中，冲冼时用水应少量多次。轻轻摇动容量瓶，待完全冷却后，用水定容，用干燥漏斗和无磷滤纸将溶液滤入干燥的100ml三角瓶中。同时做空白试验。4.吸取滤液2—10ml于50ml容量瓶中，用水稀释至30ml，加二硝基酚指示剂2滴，用稀氢氧化钠(NaOH)溶液和稀硫酸(H2SO4)溶液调节pH至溶液刚呈微黄色。5.加入钼锑抗显色剂5ml，摇匀，用水定容至刻度。6.在室温高于15℃的条件下放置30分钟后，在分光光度计上以700nm的波长比色，以空白试验溶液为参比液调零点，读取吸收值，在工作曲线上查出显色液的P—mg/L数。7.工作曲线的绘制。分别吸取5mg/L标准溶液0，1，2，3，4，5，6ml于50ml容量瓶中，加水稀释至约30ml，加入钼锑抗显色剂5ml,摇匀定容。即得0，0.1,0.2,0.3,0.4,0.5,0.6,mg/LP标准系列溶液，与待测溶液同时比色，读取吸收值。在方格坐标纸上以吸收值为纵坐标，Pmg/L数为横坐标，绘制成工作曲线。结果计算全P%=显色液mg/L×显色液体积×分取倍数／(W×106)×100式中：显色液Pmg/L—从工作曲线上查得的Pmg/L；显色液体积—本操作中为50ml；分取倍数—消煮溶液定容体积/吸取消煮溶液体积；106—将ug换算成gW—土样重(g)。两次平行测定结果允许误差为0.005%。仪器、试剂1.主要仪器：分析天平、小漏斗、大漏斗、三角瓶(50ml和100ml)、容量瓶(50ml和100ml)、移液管(5ml和10ml)、电炉、分光光度计。2.试剂：(1)0.5mol/L碳酸氢钠浸提液。称取化学纯碳酸氢钠42.0g溶于800ml水中，以0.5mol/L氢氧化钠调节pH至8.5，洗入1000ml容量瓶中，定容至刻度，贮存于试剂瓶中。此溶液贮存于塑料瓶中比在玻璃瓶中容易保存，若贮存超过1个月，应检查pH值是否改变。(2)无磷活性炭。活性碳常常含有磷，应做空白试验，检查有无磷存在。如含磷较多，须先用2mol/L盐酸浸泡过夜，用蒸馏水冲洗多次后，再用0.5mol/L碳酸氢钠浸泡过夜，在平瓷漏斗上抽气过滤，每次用少量蒸馏水淋洗多次，并检查到无磷为止。如含磷较少，则直接用碳酸氢钠处理即可。(3)磷(P)标准溶液。准确称取45℃烘干4—8小时的分析纯磷酸二氢钾0.2197g于小烧杯中，以少量水溶解，将溶液全部洗入1000ml容量瓶中，用水定容至刻度，充分摇匀，此溶液即为含50mg/L的磷基准溶液。吸取50ml此溶液稀释至500ml，即为5mg/L的磷标准溶液(此溶液不能长期保存)。比色时按标准曲线系列配制。(4)硫酸钼锑贮存液。取蒸馏水约400ml，放入1000ml烧杯中，将烧杯浸在冷水中，然后缓缓注入分析纯浓硫酸208.3ml,并不断搅拌，冷却至室温。另称取分析纯钼酸铵20g溶于约60℃的200ml蒸馏水中，冷却。然后将硫酸溶液徐徐倒入钼酸铵溶液中，不断搅拌，再加入100ml0.5%酒石酸锑钾溶液，用蒸馏水稀释至1000ml，摇匀贮于试剂瓶中。(5)二硝基酚。称取0.25g二硝基酚溶于100ml蒸馏水中。(6)钼锑抗混合色剂。在100ml钼锑贮存液中，加入1.5g左旋(旋光度+21—+22°)抗坏血酸，此试剂有效期24小时，宜用前配制。1—5.2土壤中速效磷的测定(碳酸氢钠法)了解土壤中速效磷供应状况，对于施肥有着直接的指导意义。土壤速效磷的测定方法很多，由于提取剂的不同所得的结果也不一致。提取剂的选择主要根据各种土壤性质而定，一般情况下，石灰性土壤和中性土壤采用碳酸氢钠来提取，酸性土壤采用酸性氟化铵或氢氧化钠—草酸钠法来提取。方法原理石灰性土壤由于大量游离碳酸钙存在，不能用酸溶液来提取速效磷，可用碳酸盐的碱溶液。由于碳酸根的同离子效应，碳酸盐的碱溶液降低碳酸钙的溶解度，也就降低了溶液中钙的浓度，这样就有利于磷酸钙盐的提取。同时由于碳酸盐的碱溶液也降低了铝和铁离子的活性，有利于磷酸铝和磷酸铁的提取。此外，碳酸氢钠碱溶液中存在着OH-、HCO-3、CO2-3等阴离子有利于吸附态磷的交换，因此，碳酸氢钠不仅适用于石灰性土壤，也适用于中性和酸性土壤中速效磷的提取。待测液用钼锑抗混合显色剂在常温下进行还原，使黄色的锑磷钼杂多酸还原成为磷钼蓝进行比色。操作步骤：1.称取通过18号筛(孔径为1mm)的风干土样5g(精确到0.01g)于200ml三角瓶中，准确加入0.5mol/L碳酸氢钠溶液100ml,再加一小角勺无磷活性碳，塞紧瓶塞，在振荡机上振荡30分钟(振荡机速率为每分钟150—180次)，立即用无磷滤纸干过滤，滤液承接于100ml三角瓶中。最初7～8ml滤液弃去。2.吸取滤液10ml(含磷量高时吸取2.5—5ml；同时应补加0.5mol/L碳酸氢钠溶液至10ml)于50ml量瓶中，加硫酸钼锑抗混合显色剂5ml充分摇匀，排出二氧化碳后加水定容至刻度，再充分摇匀。3.30分钟后，在分光光度计上比色(波长660nm)，比色时须同时做空白测定。4.磷标准曲线绘制：分别吸取5mg/L磷标准溶液0、1、2、3、4、5ml于50ml容量瓶中，每一容量瓶即为0、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5mg/L磷，再逐个加入0.5mol/L碳酸氢钠10ml和硫酸一钼锑抗混合显色剂5ml，然后同待测液一样进行比色。绘制标准曲线。结果计算土壤速效Pmg/kg=比色液mg/L×定容体积/W×分取倍数式中：比色液mg/L—从工作曲线上查得的比色液磷的mg/L数；W—称取土样重量(g)。分取倍数—100/10土壤速效磷(P)mg/kg等级＜5低5—10中＞10高注意事项1.活性碳一定要洗至无磷无氯反应。2.钼锑抗混合剂的加入量要十分准确，特别是钼酸量的大小，直接影响着显色的深浅和稳定性。标准溶液和待测液的比色酸度应保持基本一致，它的加入量应随比色时定容体积的大小按比例增减。3.温度的大小影响着测定结果。提取时要求温度在25℃左右。室温太低时，可将容量瓶放入40—50℃的烘箱或热水中保温20分钟，稍冷后方可比色仪器药品1.主要仪器：往复振荡机、电子天平(1/100)、分光光度计、三角瓶(250ml和100ml)、烧杯(100ml)、移液管(10ml、50ml)、容量瓶(50ml)、吸耳球、漏斗(60ml)、滤纸、坐标纸、擦镜纸、小滴管。2.试剂配制：见1—5.1。
❸ 哪位老师能告诉我土壤中有效氮、有效磷、有效钾的测定方法感激不尽.......
1—4 土壤中氮的测定(全氮、速效氮)
1—4.1 土壤全氮量的测定(重铬酸钾—硫酸消化法)。
土壤含氮量的多少及其存在状态，常与作物的产量在某一条件下有一定的正相关，从目前我国土壤肥力状况看，80%左右的土壤都缺乏氮素。因此，了解土壤全氮量，可作为施肥的参考，以便指导施肥达到增产效果。
方法原理
土壤与浓硫酸及还原性催化剂共同加热，使有机氮转化成氨，并与硫酸结合成硫酸铵；无机的铵态氮转化成硫酸铵；极微量的硝态氮在加热过程中逸出损失；有机质氧化成CO2。样品消化后，再用浓碱蒸馏，使硫酸铵转化成氨逸出，并被硼酸所吸收，最后用标准酸滴定。主要反应可用下列方程式表示：
NH2·CH2CO·NH-CH2COOH+H2SO4=2NH2-CH2COOH+SO2+［O］
NH2-CH2COOH+3H2SO4=NH3+2CO2↑+3SO2↑+4H2O
2NH2-CH2COOH+2K2Cr2O7+9H2SO4=(NH4)2SO4+2K2SO4+2Cr2(SO4)3+4CO2↑+10H2O
(NH4)2SO4＋2NaOH=Na2SO4+2H2O+2NH3↑
NH3+H3BO3=H3BO3·NH3
H3BO3·NH3+HCl=H3BO3+NH4Cl
操作步骤
1.在分析天平上称取通过60号筛(孔径为0.25mm)的风干土壤样品0.5—1g(精确到0.001g)，然后放入150ml开氏瓶中。
2.加浓硫酸(H2SO4)5ml，并在瓶口加一只弯颈小漏斗，然后放在调温电炉上高温消煮15分钟左右，使硫酸大量冒烟，当看不到黑色碳粒存在时即可(如果有机质含量超过5%时，应加1—2g焦硫酸钾，以提高温度加强硫酸的氧化能力)。
3.待冷却后，加5ml饱和重铬酸钾溶液，在电炉上微沸5分钟，这时切勿使硫酸发烟。
4.消化结束后，在开氏瓶中加蒸馏水或不含氮的自来水70ml，摇匀后接在蒸馏装置上，再用筒形漏斗通过Y形管缓缓加入40%氢氧化钠(NaOH)25ml。
5.将一三角瓶接在冷凝管的下端，并使冷凝管浸在三角瓶的液面下，三角瓶内盛有25ml 2%硼酸吸收液和定氮混合指示剂1滴。
6.将螺丝夹打开(蒸汽发生器内的水要预先加热至沸)，通入蒸汽，并打开电炉和通自来水冷凝。
7.蒸馏20分钟后，检查蒸馏是否完全。检查方法：取出三角瓶，在冷凝管下端取1滴蒸出液于白色瓷板上，加纳氏试剂1滴，如无黄色出现，即表示蒸馏完全，否则应继续蒸馏，直到蒸馏完全为止(或用红色石蕊试纸检验)。
8.蒸馏完全后，降低三角瓶的位置，使冷凝管的下端离开液面，用少量蒸馏水冲洗冷凝的管的下端(洗入三角瓶中)，然后用0.02mol/L盐酸(HCl)标准液滴定，溶液由蓝色变为酒红色时即为终点。记下消耗标准盐酸的毫升数。
测定时同时要做空白试验，除不加试样外，其它操作相同。
结果计算
N%=[ (V-V0)×N×0.014]／样品重×100
式中：
V—滴定时消耗标准盐酸的毫升数；
V0—滴定空白时消耗标准盐酸的毫升数；
N—标准盐酸的摩尔浓度；
0.014—氮原子的毫摩尔质量g/mmol；
100—换算成百分数。
注意事项
1.在使用蒸馏装置前，要先空蒸5分钟左右，把蒸汽发生器及蒸馏系统中可能存在的含氮杂质去除干净，并用纳氏试剂检查。
2.样品经浓硫酸消煮后须充分冷却，然后再加饱和重铬酸钾溶液，否则作用非常激烈，易使样品溅出。加入重铬酸钾后，如果溶液出现绿色，或消化1—2分钟后即变绿色，这说明重铬酸钾量不足，在这种情况下，可补加1g固体重铬酸钾(K2Cr2O7)，然后继续消化。
3.若蒸馏产生倒吸现象，可再补加硼酸吸收液，仍可继续蒸馏。
4.在蒸馏过程中必须冷凝充分，否则会使吸收液发热，使氨因受热而挥发，影响测定结果。
5.蒸馏时不要使开氏瓶内温度太低，使蒸气充足，否则易出现倒吸现象。另外，在实验结束时要先取下三角瓶，然后停止加热，或降低三角瓶使冷凝管下端离开液面。
仪器、试剂
1.主要仪器：开氏瓶(150ml)、弯颈小漏斗、分析天平、电炉、普通定氮蒸馏装置。
2.试剂：
(1) 浓硫酸(化学纯，比重1.84)。
(2)饱和重铬酸钾溶液。称取200g(化学纯)重铬酸钾溶于1000ml热蒸馏水中。
(3)40%氢氧化钠(NaOH)溶液。称取工业用氢氧化钠(NaOH)400g，加水溶解不断搅拌，再稀释定容至1000ml贮于塑料瓶中。
(4)2%硼酸溶液。称取20g硼酸加入热蒸馏水(60℃)溶解，冷却后稀释定容至1000ml，最后用稀盐酸(HCl)或稀氢氧化钠(NaOH)调节pH至4.5(定氮混合指示剂显葡萄酒红色)。
(5)定氮混合指示剂。称取0.1g甲基红和0.5g溴甲酚绿指示剂放入玛瑙研钵中，加入100ml95%酒精研磨溶解，此液应用稀盐酸(HCl)或氢氧化钠(NaOH)调节pH至4.5。
(6)0.02mol/L盐酸标准溶液。取浓盐酸(HCl)(比重1.19)1.67ml，用蒸馏水稀释定容至1000ml，然后用标准碱液或硼砂标定。
(7)钠氏试剂(定性检查用)。称氢氧化钾(KOH)134g溶于460ml蒸馏水中；称取碘化钾(KI)20g溶于50ml蒸馏水中，加碘化汞(HgI)使溶液至饱和状态(大约32g左右)。然后将以上两种溶液混合即成。
1—4.2 土壤水解性氮的测定(碱解扩散法)
土壤水解性氮，包括矿质态氮和有机态氮中比较易于分解的部分。其测定结果与作物氮素吸收有较好的相关性。测定土壤中水解性氮的变化动态，能及时了解土壤肥力，指导施肥。
测定原理
在密封的扩散皿中，用1.8mol/L氢氧化钠(NaOH)溶液水解土壤样品，在恒温条件下使有效氮碱解转化为氨气状态，并不断地扩散逸出，由硼酸(H3BO3)吸收，再用标准盐酸滴定，计算出土壤水解性氮的含量。旱地土壤硝态氮含量较高，需加硫酸亚铁使之还原成铵态氮 。由于硫酸亚铁本身会中和部分氢氧化钠，故需提高碱的浓度(1.8mol/L，使碱保持1.2mol/L的浓度)。水稻土壤中硝态氮含量极微，可以省去加硫酸亚铁，直接用1.2mol/L氢氧化钠水解。
操作步骤
1.称取通过18号筛(孔径1mm)风干样品2g(精确到0.001g)和1g硫酸亚铁粉剂，均匀铺在扩散皿外室内，水平地轻轻旋转扩散皿，使样品铺平。(水稻土样品则不必加硫酸亚铁。)
2.用吸管吸取2%硼酸溶液2ml，加入扩散皿内室，并滴加1滴定氮混合指示剂，然后在皿的外室边缘涂上特制胶水，盖上毛玻璃，并旋转数次，以便毛玻璃与皿边完全粘合，再慢慢转开毛玻璃的一边，使扩散皿露出一条狭缝，迅速用移液管加入10ml1.8mol/L氢氧化钠于皿的外室(水稻土样品则加入10ml1.2mol/L氢氧化钠)，立即用毛玻璃盖严。
3.水平轻轻旋转扩散皿，使碱溶液与土壤充分混合均匀，用橡皮筋固定，贴上标签，随后放入40℃恒温箱中。24小时后取出，再以0.01mol/LHCl标准溶液用微量滴定管滴定内室所吸收的氮量，溶液由蓝色滴至微红色为终点，记下盐酸用量毫升数V。同时要做空白试验，滴定所用盐酸量为V0。
结果计算
水解性氮(mg/100g土)= N×(V-V0)×14／样品重×100
式中：
N—标准盐酸的摩尔浓度；
V—滴定样品时所用去的盐酸的毫升数；
V0—空白试验所消耗的标准盐酸的毫升数；
14—一个氮原子的摩尔质量mg/mol；
100—换算成每百克样品中氮的毫克数。
注意事项
(1)滴定前首先要检查滴定管的下端是否充有气泡。若有，首先要把气泡排出。
(2)滴定时，标准酸要逐滴加入，在接近终点时，用玻璃棒从滴定管尖端沾取少量标准酸滴入扩散皿内。
(3)特制胶水一定不能沾污到内室，否则测定结果将会偏高。
(4)扩散皿在抹有特制胶水后必须盖严，以防漏气。
主要仪器
扩散皿、微量滴定管、1/1000分析天平、恒温箱、玻璃棒 毛玻璃、皮筋、吸管(2ml和10ml)，腊光纸、角匙、瓷盘。
试剂
(1)1.8mol/L氢氧化钠溶液。称取化学纯氢氧化钠72g，用蒸馏水溶解后冷却定容到1000ml。
(2)1.2mol/L氢氧化钠溶液。称取化学纯氢氧化钠48g,用蒸馏水溶解定容到1000ml。
(3)2%硼酸溶液。称取20g硼酸，用热蒸馏水(约60℃)溶解，冷却后稀释至1000ml，用稀盐酸或稀氢氧化钠调节pH至4.5(定氮混合指示剂显葡萄酒红色)。
(4)0.01mol/L盐酸标准溶液。先配制1.0mol/L盐酸溶液，然后稀释100倍，用标准碱标定。
(5)定氮混合指示剂。与土壤全氮的测定配法相同。
(6)特制胶水。阿拉伯胶(称取10g粉状阿拉伯胶，溶于15ml蒸馏水中)10份、甘油10份，饱和碳酸钾5份混合即成(最好放置在盛有浓硫酸的干燥器中以除去氨)。
(7)硫酸亚铁(粉状)。将分析纯硫酸亚铁磨细保存于阴凉干燥处。
1—5 土壤中磷的测定(全磷、速效磷)
1—5.1 土壤全磷的测定(硫酸一高氯酸消煮法)
方法原理
在高温条件下，土壤中含磷矿物及有机磷化合物与高沸点的硫酸和强氧化剂高氯酸作用，使之完全分解，全部转化为正磷酸盐而进入溶液，然后用钼锑抗比色法测定。
操作步骤
1.在分析天平上准确称取通过100目筛(孔径为0.25mm)的土壤样品1g(精确到0.0001)置于50ml三角瓶中，以少量水湿润，并加入浓H2SO48ml，摇动后(最好放置过夜)再加入70—72%的高氯酸(HClO4)10滴摇匀。
2.于瓶口上放一小漏斗，置于电炉上加热消煮至瓶内溶液开始转白后，继续消煮20分钟，全部消煮时间约为45—60分钟。
3.将冷却后的消煮液用水小心地洗入100ml容量瓶中，冲冼时用水应少量多次。轻轻摇动容量瓶，待完全冷却后，用水定容，用干燥漏斗和无磷滤纸将溶液滤入干燥的100ml三角瓶中。同时做空白试验。
4.吸取滤液2—10ml于50ml容量瓶中，用水稀释至30ml，加二硝基酚指示剂2滴，用稀氢氧化钠(NaOH)溶液和稀硫酸(H2SO4)溶液调节pH至溶液刚呈微黄色。
5.加入钼锑抗显色剂5ml，摇匀，用水定容至刻度。
6.在室温高于15℃的条件下放置30分钟后，在分光光度计上以700nm的波长比色，以空白试验溶液为参比液调零点，读取吸收值，在工作曲线上查出显色液的P—mg/L数。
7.工作曲线的绘制。分别吸取5mg/L标准溶液0，1，2，3，4，5，6ml于50ml容量瓶中，加水稀释至约30ml，加入钼锑抗显色剂5ml,摇匀定容。即得0，0.1,0.2,0.3,0.4,0.5,0.6,mg/LP标准系列溶液，与待测溶液同时比色，读取吸收值。在方格坐标纸上以吸收值为纵坐标，Pmg/L数为横坐标，绘制成工作曲线。
结果计算
全P %=显色液mg/L×显色液体积×分取倍数／(W×106)×100
式中：
显色液Pmg/L—从工作曲线上查得的Pmg/L；
显色液体积—本操作中为50ml；
分取倍数—消煮溶液定容体积/吸取消煮溶液体积；
106—将ug换算成g
W—土样重(g)。
两次平行测定结果允许误差为0.005%。
仪器、试剂
1.主要仪器：
分析天平、小漏斗、大漏斗、三角瓶(50ml和100ml)、容量瓶(50ml和100ml)、移液管(5ml和10ml)、电炉、分光光度计。
2.试剂：
(1)0.5mol/L碳酸氢钠浸提液。称取化学纯碳酸氢钠42.0g溶于800ml水中，以0.5mol/L氢氧化钠调节pH至8.5，洗入1000ml容量瓶中，定容至刻度，贮存于试剂瓶中。此溶液贮存于塑料瓶中比在玻璃瓶中容易保存，若贮存超过1个月，应检查pH值是否改变。
(2)无磷活性炭。活性碳常常含有磷，应做空白试验，检查有无磷存在。如含磷较多，须先用2mol/L盐酸浸泡过夜，用蒸馏水冲洗多次后，再用0.5mol/L碳酸氢钠浸泡过夜，在平瓷漏斗上抽气过滤，每次用少量蒸馏水淋洗多次，并检查到无磷为止。如含磷较少，则直接用碳酸氢钠处理即可。
(3)磷(P)标准溶液。准确称取45℃烘干4—8小时的分析纯磷酸二氢钾0.2197g于小烧杯中，以少量水溶解，将溶液全部洗入1000ml容量瓶中，用水定容至刻度，充分摇匀，此溶液即为含50mg/L的磷基准溶液。吸取50ml此溶液稀释至500ml，即为5mg/L的磷标准溶液(此溶液不能长期保存)。比色时按标准曲线系列配制。
(4)硫酸钼锑贮存液。取蒸馏水约400ml，放入1000ml烧杯中，将烧杯浸在冷水中，然后缓缓注入分析纯浓硫酸208.3ml,并不断搅拌，冷却至室温。另称取分析纯钼酸铵20g溶于约60℃的200ml蒸馏水中，冷却。然后将硫酸溶液徐徐倒入钼酸铵溶液中，不断搅拌，再加入100ml0.5%酒石酸锑钾溶液，用蒸馏水稀释至1000ml，摇匀贮于试剂瓶中。
(5)二硝基酚。称取0.25g二硝基酚溶于100ml蒸馏水中。
(6)钼锑抗混合色剂。在100ml钼锑贮存液中，加入1.5g左旋(旋光度+21—+22°)抗坏血酸，此试剂有效期24小时，宜用前配制。
1—5.2 土壤中速效磷的测定(碳酸氢钠法)
了解土壤中速效磷供应状况，对于施肥有着直接的指导意义。土壤速效磷的测定方法很多，由于提取剂的不同所得的结果也不一致。提取剂的选择主要根据各种土壤性质而定，一般情况下，石灰性土壤和中性土壤采用碳酸氢钠来提取，酸性土壤采用酸性氟化铵或氢氧化钠—草酸钠法来提取。
方法原理
石灰性土壤由于大量游离碳酸钙存在，不能用酸溶液来提取速效磷，可用碳酸盐的碱溶液。由于碳酸根的同离子效应，碳酸盐的碱溶液降低碳酸钙的溶解度，也就降低了溶液中钙的浓度，这样就有利于磷酸钙盐的提取。同时由于碳酸盐的碱溶液也降低了铝和铁离子的活性，有利于磷酸铝和磷酸铁的提取。此外，碳酸氢钠碱溶液中存在着OH-、HCO-3、CO2-3等阴离子有利于吸附态磷的交换，因此，碳酸氢钠不仅适用于石灰性土壤，也适用于中性和酸性土壤中速效磷的提取。
待测液用钼锑抗混合显色剂在常温下进行还原，使黄色的锑磷钼杂多酸还原成为磷钼蓝进行比色。
操作步骤：
1.称取通过18号筛(孔径为1mm)的风干土样5g(精确到0.01g)于200ml三角瓶中，准确加入0.5mol/L碳酸氢钠溶液100ml,再加一小角勺无磷活性碳，塞紧瓶塞，在振荡机上振荡30分钟(振荡机速率为每分钟150—180次)，立即用无磷滤纸干过滤，滤液承接于100ml三角瓶中。最初7～8ml滤液弃去。
2.吸取滤液10ml(含磷量高时吸取2.5—5ml；同时应补加0.5mol/L碳酸氢钠溶液至10ml)于50ml量瓶中，加硫酸钼锑抗混合显色剂5ml充分摇匀，排出二氧化碳后加水定容至刻度，再充分摇匀。
3.30分钟后，在分光光度计上比色(波长660nm)，比色时须同时做空白测定。
4.磷标准曲线绘制：分别吸取5mg/L磷标准溶液0、1、2、3、4、5ml于50ml容量瓶中，每一容量瓶即为0、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5mg/L磷，再逐个加入0.5mol/L碳酸氢钠10ml和硫酸一钼锑抗混合显色剂5ml，然后同待测液一样进行比色。绘制标准曲线。
结果计算
土壤速效Pmg/kg=比色液mg/L×定容体积/W×分取倍数
式中：
比色液mg/L—从工作曲线上查得的比色液磷的mg/L数；
W—称取土样重量(g)。
分取倍数—100/10
土壤速效磷(P)mg/kg 等级
＜5 低
5—10 中
＞10 高
注意事项
1.活性碳一定要洗至无磷无氯反应。
2.钼锑抗混合剂的加入量要十分准确，特别是钼酸量的大小，直接影响着显色的深浅和稳定性。标准溶液和待测液的比色酸度应保持基本一致，它的加入量应随比色时定容体积的大小按比例增减。
3.温度的大小影响着测定结果。提取时要求温度在25℃左右。室温太低时，可将容量瓶放入40—50℃的烘箱或热水中保温20分钟，稍冷后方可比色
仪器药品
1.主要仪器：往复振荡机、电子天平(1/100)、分光光度计、三角瓶(250ml和100ml)、烧杯(100ml)、移液管(10ml、50ml)、容量瓶(50ml)、吸耳球、漏斗(60ml)、滤纸、坐标纸、擦镜纸、小滴管。
2.试剂配制：见1—5.1。
❹ 如何测定蔬菜样品中的全磷
答：待测液的制备如下：
（1）同蔬菜样品全氮的测定中不包括硝态氮的消煮方法（1）或（2）
（2）硫酸—硝酸—高氯酸（三酸）消煮法
① 适用范围：本消煮液可供包括磷在内的无机成分分析用。消煮时硝酸分解放出新生态氧，具有很强的氧化力，而硫酸的存在可加速氧化过程。高氯酸加热时生成无水高氯酸，可进一步与有机质作用，分解成水、氯、氧、新生态氯和氧，具有很强的氧化力，使有机复合体很快被氧化分解成简单的可溶性化合物，二氧化硅则脱水沉淀。
② 试剂配制：
三酸混合液：硫酸（比重1.84）—硝酸（比重1.42）—高氯酸（60%）以1∶8∶1混合。
10%的盐酸（HCl）溶液V/V∶10毫升浓盐酸稀释至100毫升。
0.5%盐酸溶液：0.5毫升浓盐酸稀释至100毫升。
③ 测定步骤：称取通过0.5毫米孔径的蔬菜样品2.0000克，放于100毫升三角瓶中，放入玻璃珠2～3粒以防跳动，瓶口加以弯颈小漏斗，加入10毫升三酸混合液，在通风橱内放置过夜。然后将三角瓶置于电热版上低温消煮40分钟后，逐渐升高温度，待消化物残留较少，消煮液呈白色时，再升高温度使高氯酸分解，冒白色浓烟，约2～3分钟即可分解完全，直至硫酸从瓶颈回流时（出现缕状白烟）即刻取下三角瓶，以防磷的损失。
用约20毫升10%的盐酸热溶液洗涤小漏斗，洗液注入三角瓶中。再加热溶解残渣至沸腾，随即用7～9厘米的无灰快速滤纸过滤滤液于100毫升容量瓶中，用热的0.5%盐酸液洗涤滤纸及沉淀，直至近刻度时再加水定容，摇匀备用。此待测液可供磷、钾、钠、钙、镁、锰、铁、铝测定用。滤纸上的残渣可作二氧化硅（SiO2）定量的测定。
样品中磷的测定：
（1）钒钼黄比色法
① 测定原理：适合于含磷量较高的蔬菜样品的测定（如籽粒样品）。消煮液中的正磷酸与偏钒酸和钼酸反应生成黄色的三元杂多酸，其吸光度与磷浓度呈正比，可在波长400～490纳米处用分光光度法测定。磷浓度较高时选用较长的波长，较低时选用较短的波长。
此法的优点是操作简便，可在室温下显色，黄色稳定。在硝酸、硫酸、高氯酸等介质中都适用，对酸度和显色剂的要求也不是太严格，干扰物少。在可见光范围内灵敏度较低，但适测范围广（约为1～20毫克/千克P），故广泛应用于含磷较高而且变幅较大的植物和肥料样品中的测定。
② 试剂配制：
钒钼酸铵溶液：钼酸铵（分析纯）25.0克溶于400毫升水中。另将偏钒酸铵（分析纯）1.25克溶于300毫升沸水中，冷却后加入250毫升浓硝酸（分析纯）。将钼酸铵溶液缓缓注入钒酸铵溶液中，不断搅匀，最后加水稀释至1升贮于棕色瓶中。
氢氧化钠（NaOH）溶液（6摩尔/升）：称取24克氢氧化钠溶于水中，稀释至100毫升。
二硝基酚指示剂：称取0.25克2，6（或2，4）-二硝基酚溶于100毫升水中。
磷标准溶液［ρ（P）=50毫克/升］：称取在105℃烘干3小时的磷酸二氢钾（KH2PO4，分析纯）0.2195克溶于少量水，移入1升容量瓶中，加入浓硝酸5毫升后定容。
主要仪器：分光光度计。
③ 测定步骤：准确吸取待测液5～10毫升（V2，0.05～0.75毫克）于50毫升容量瓶中加蒸馏水使体积约为35毫升，加2滴二硝基酚指示剂，用6摩尔/升NaOH或6摩尔/升HNO3中和至溶液刚呈微黄色，准确加入10毫升钒钼酸铵试剂，用水定容至刻度（V2），摇匀。放置15分钟后分光光度计比色（采用450纳米波长及1厘米光径比色杯进行测定）。同时做空白试验进行比色。在标准曲线上查得各自的毫克/升值。
标准曲线或回归方程：准确吸取50毫克/升P标准液0、1.0、2.0、7.5、10.0、15.0毫升分别放入50毫升容量瓶中，加蒸馏水约至35毫升，按上述步骤显色，比色测读吸光度。以系列标准液浓度0、1.0、2.5、5.0、7.5、10、15毫克/升P为横坐标，吸光度为纵坐标绘制工作曲线，或求回归方程。
④ 结果计算：
ω（P）＝ρ（P）×（V1/m）×（V 3/V 2）×10－4
式中：ω（P）——植物样品中磷的质量分数（%）；
ρ（P）——从标准曲线或回归方程求得的显色液中磷的质量浓度（毫克/升）；
V1——待测液定容总体积（毫升）；
V2——比色测定时吸取待测液的体积（毫升）；
V3——显色液定容体积（毫升）；
m——样品重量（克）；
10－4——将毫克/升浓度单位换算成%。
⑤ 注释：
［1］显色液中ρ（P）＝1～5毫克/升时，测定波长用420纳米；5～20毫克/升时，测定波长用490纳米；待测液中铁含量高时应选用450纳米以清除铁离子的干扰。标准曲线应用同样波长测定绘制。也可用空白样液（即在待测液中不加显色剂）调整比色计的吸收值为零点的办法来消除干扰。
［2］一般室温下，温度对显色影响不大，但室温太低（如＜15℃）时，需显色30分钟，稳定时间可达24小时。
［3］如试液为HCl、HClO4介质，显色剂应用HCl配制；试液为H2SO4介质，显色剂要用H2SO4配制；显色液酸的适宜浓度范围为0.2～1.6摩尔/升。酸度高显色慢且不完全，甚至不显色；低于0.2 摩尔/升时易产生沉淀物，干扰测定。钼酸盐在显色液中的终浓度适宜范围为1.6×10－3～1.0×10－2摩尔/升，钒酸盐为8.0×10-5～2.2×10－3摩尔/升。
（2）钼锑抗分光光度法
① 方法原理：适合含磷量较低的植物样品的测定（如茎秆样品等）。
蔬菜样品经酸消煮处理后使各种形态的磷转化成磷酸盐，在一定磷浓度范围内，在酸性介质中待测液中的正磷酸与钼酸钠和酒石酸锑钾生成一种三元杂多酸，后者在室温下能迅速被抗坏血酸还原为蓝色络合物，可用分光光度计测定。
② 试剂配制：
6摩尔/升NaOH溶液。
0.2%二硝基酚指示剂。
2摩尔/升H2SO4溶液：5.6毫升浓H2SO4加水至100毫升。
钼锑抗贮存液：浓H2SO4 （分析纯）126毫升缓慢地注入约400毫升水中，搅拌冷却。称取10.0克钼酸铵（分析纯）溶解于约60℃的300毫升温水中，冷却。然后将硫酸溶液缓缓倒入钼酸铵溶液中，再加入100毫升0.5%酒石酸锑钾（KSbOC4O6·1/2H2O，分析纯）溶液，最后用水稀释至1升，避光贮存。此贮存液含钼酸铵为1%，酸浓度为c（1/2 H2SO4）＝4.5摩尔/升。
钼锑抗显色剂：1.5克抗坏血酸（C6H8O6，分析纯）溶于100毫升钼锑抗贮存液中。此液需随配随用，有效期1天，而冰箱中存放，可用3～4天。
磷标准工作液：［ρ（P）＝5毫克/升］：吸取100毫克/升P标准贮存液稀释20倍，即为5毫克/升P标准工作溶液，此液不宜久存。
③ 测定步骤：准确吸取待测液2.00～5.00毫升（V2，含P 5～30微克）与50毫升容量瓶中，用水稀释至约30毫升，加 1～2滴二硝基酚指示剂，滴加6摩尔/升NaOH溶液中和至刚呈黄色，再加入1滴2摩尔/升 H2SO4溶液使溶液的黄色刚刚褪去，然后加入钼锑抗显色剂5.00毫升，摇匀定容（V3）。在室温高于15℃的条件下放置30分钟后，用1厘米光径比色杯在波长700纳米处测定吸光度，以空白溶液为参比调节仪器零点。
标准曲线或回归方程：准确吸取ρ（P）＝5毫克/升标准工作溶液0、1、4、6、8毫升，分别放入50毫升容量瓶中，加水至约30毫升，同上步骤显色并定容，即得0、0.1、0.2、0.4、0.6、0.8毫克/升P标准系列溶液，与待测液同时测定，读取吸光度。然后绘制标准曲线或直线回归方程。
④ 结果计算：同（1）计算公式。
根据分光光度计的性能，可选用650～890纳米波长处测定，880～890纳米处灵敏度高。
❺ 钼锑钪比色法
微量磷的测定一般采用磷钼蓝或钼锑钪光度法。磷钼蓝是将磷酸与钼酸铵在酸性条件下生成黄色磷钼杂多酸，然后用还原剂将黄色的磷钼杂多酸还原成磷钼杂多蓝，进行测定。常用的还原剂有氯化亚锡、硫酸联氨、抗坏血酸等。用硫酸联氨和抗坏血酸作还原剂时，反应速度慢，且需沸水浴加热，操作较麻烦；用氯化亚锡作还原剂，灵敏度高，显色快，但蓝色的稳定性稍差，对酸度和钼酸铵浓度的控制要求严格；若用抗坏血酸加酒石酸锑钾作还原剂，也可以使磷钼杂多酸转化成稳定的蓝色溶液，此法称为钼锑钪法。
钼锑钪法操作实例：
森林土壤有效磷的测定
1 0.05mol/L HCl-0.025mol/L 1/2H2So4浸提法
本方法适用于质地较轻的酸性森林土壤中有效磷测定.
1.1 方法要点
以0.05mol/L HCl-0.025mol/L 1/2H2So4溶液浸提酸性森林土壤样品，使这类土壤中比较具有活性的磷酸铁、铝盐陆续被溶解释放。
1.2 试剂
① 双酸浸提剂（0.05mol/L HCl-0.025mol/L 1/2H2So4） ：吸取4.0ml浓盐酸（分析纯）及0.7ml浓硫酸（分析纯）于有水的1L容量瓶中，用水稀释至标度。
② 1%高锰酸钾溶液： 1g高锰酸钾（KMnO4，分析纯）加100ml水。
③ 0.5％草酸溶液： 0.5g草酸（H2C2O4，分析纯）加水100ml。
④ 2,4－二硝基酚（或2,6－二硝基酚）指示剂：溶解0.20g2,4－二硝基酚于100ml 95％乙醇中。
⑤ 2mol/L氢氧化钠溶液： 80.0g氢氧化钠溶于水，用水定容到1L。
⑥ 0.5mol/L硫酸溶液：吸取28.0ml浓硫酸，缓缓注入于水中，用水定容至1L。
⑦ 钼锑贮存液：153ml浓硫酸，缓慢地到入约400ml水中，搅拌，冷却。另取10g钼酸铵，溶解于约60℃的300ml水中，冷却。然后将硫酸溶液缓缓到入钼酸铵溶液中，再加入100ml10.5％酒石酸锑钾溶液，最后用水稀释至1L，避光保存。此贮存液含1％钼酸铵、2.75mol/L硫酸。
⑧ 钼锑钪显色剂：1.50g抗坏血酸溶于100ml钼锑贮存液中。此液须随配随用。
⑨ 5ppm磷标准溶液： 0.4394g在50℃烘干的磷酸二氢钾， 加100ml水，加5ml浓硫酸（防腐），用水定容到1L，浓度为100ppm磷，此溶液可以长期保存。吸取上述溶液10ml于200ml容量瓶中，加水至标度，浓度为5ppm磷标准溶液，此溶液不宜久存。
1.3 主要仪器
分光光度计； 往复振荡机 （速率每分钟150-180次） ； 容量瓶（50ml）。
1.4 测定步骤
1.4.1 待测液的制备：称取5.0g（精确到0.01g）通过2mm筛孔的风干土样于浸提瓶中。加25ml双酸浸提液剂，振荡5min，过滤，待测液供测有效磷用。同时做试剂空白试验。
1.4.2 测定：吸取待测液2-10ml于50ml容量瓶中，加1滴2,4-二硝基酚指示剂，用2mol/L氢氧化钠溶液调到黄色，然后用0.5mol/L硫酸溶液调ph到溶液刚呈微黄色。用吸管加5ml钼锑抗显色剂，用水定容到标度，摇匀。30min后，在分光光度计上用2cm光径比色皿（如含磷量较高，应用1cm的比色皿）、700nm波长比色，以空白试验溶液为参比液，调吸收值到零，然后测定待测显色液的吸收值。在工作曲线上查出显色液的磷ppm数，颜色在8h内可保持稳定。
如待测液中的棕色有机质影响比色时需脱色，步骤如下：于已有待测液的容量瓶中加1-4ml 1mol/L硫酸，加入水到15-20ml，加2滴1%高锰酸钾， 把容量瓶在电炉上加热至沸，立即取下，加1滴0.5%草酸，摇匀，等溶液颜色稳定后，若还有色，再加1滴0.5％草酸，再加热，一般加1-3滴0.5％草酸即可无色，切不可多加。
1.4.3 工作曲线的绘制：分别吸取5ppm磷的标准溶液0、1、2、3、4、5、6ml于50ml容量瓶中，与测定时同样进行显色，得0、0.1、0.2、0.3、 0.4、0.5、0.6ppm磷标准系列显色液。用0ppm磷标准系列显色液作参比，调吸收值到零，由稀到浓测标准系列显色液的吸收值。在方格纸上以吸收值作纵坐标，磷ppm数为横坐标绘制工作曲线。
1.5 结果计算
c×V×ts
有效磷（ P，ppm）＝ ———— (1)
m 1 ×k 2
有效磷（ P，mg/kg）=有效磷（P，ppm） (2)
式中：c---从工作曲线上查得显色液的磷ppm数；
V---显色液体积，50ml；
浸提液总体积(ml)
ts---分取倍数，ts＝—————————；
吸取浸出液体积(ml)
K 2 ---由风干土样换算成烘干土样的水分换算系数；
m 1 ---风干土样质量，g。
❻ 有效磷的测定中为什么用10ml钼锑抗
国家农业标准中，采用碳酸氢钠浸提－钼锑抗比色法（Olsen 法）测定石灰性土壤中（中性及酸性土可参照使用）的有效磷含量（其中操作规程以下简称规程），其中校准曲线或回归方程较易做出或求出，因此也较容易测定。但是，要提高其测定准确性，减轻劳动量还需要注意以下几点。
（1）所用的试剂要按规程要求准确配制。一是选用质量合格的仪器、药品、试剂、纯水，要求测定者首先对要使用的仪器进行校准，在试剂的配制中注意观察药品、试剂、纯水的颜色，发现异常要查找原因；二是精确称取或量取；三是按规程要求的步骤顺序配制，调节酸碱度。但需要说明的是：①该规程要求的钼锑抗显色剂，称取的抗坏血酸（C6H8O6左旋，旋光度+21°－22°）0.5g 溶于100mL 钼锑贮备液中测定的结果，土壤有效磷含量要低于称取1.5g 抗坏血酸溶于100mL 钼锑贮备液中测定的结果。②配制磷标准贮备液的KH2PO4要选用优级纯的，而且要经过105℃烘干2h，并冷却后再称取配制。
（2）所需试剂要按规程要求保存与使用。钼锑贮备液要盛放于棕色瓶中，避光存放；钼锑抗显色剂要现用现配。
（3）所用的器械要反复冲洗干净，有的还要干燥。测定中所用的（刻度、胖肚）吸管、塑料瓶、瓶盖、漏斗、三角瓶、容量瓶、瓶塞、比色皿要反复冲洗干净，塑料瓶、瓶盖、漏斗、三
角瓶需烘干后再用。
（4）要严格土液比、温度、振荡频率及振荡时间。由于这4 个方面对浸提出的磷含量有至关重要影响，因此一定要严格控制。①要严格土液比。即风干土样准确称取2.50g（电子天平先预热30min，再校准后使用），加入的碳酸氢钠浸提剂准确量取50.00mL。②要严格浸提温度。可把浸提剂先放在恒温（25±1）℃的环境中，调温至（25±1）℃，再加入到称取的测土样塑料瓶中；振荡要使用恒温水浴振荡机，先使水温调至（25±1）℃，并保持该水温振荡。③严格振荡频率及时间。使用恒温水浴振荡机振荡，振荡频率应调为（180±20）rpm，振荡时间为（30±1）min 后，立即过滤。
（5）盛有风干土样的塑料瓶，在加入浸提剂后，要盖紧瓶盖，摇匀后再振荡。
（6）过滤要使用无磷定量滤纸，若发现滤液混浊，要重新过滤。
（7）在吸取（量取）、称取所需试剂、溶液、药品时，不仅质量（体积）要准，而且不能污染和相互污染。
（8）在吸取5.00mL 钼锑抗显色剂加入盛有系列溶液或浸提液的容量瓶中时，要缓慢加入，并慢慢摇动，排出CO2气体，再用纯水定容摇匀。要避免试液溢出。
（9）定容摇匀后的待测系列溶液或试样溶液，显色温度要保持在20℃以上，若室内温度过低，可放置于30～40℃的恒温箱中保温30min（温度要一致），使其充分显色，取出冷却后再比色测定。
（10）测定吸光度的1cm 光径比色皿，可用稀盐酸浸泡一夜，再依次用自来水、纯水冲洗干净，泡于纯水中待用，若长期不用应放置于干燥盒内。
（11）测定吸光度的比色皿，在出厂时应经过配对。未配对的，测定人员可将其刷洗干净后，自行配对，从中选用经调零后吸光度相差±0.001A 的比色皿，最好选择吸光度一致的比色皿。使用时要使光滑面对准光路，操作人员操作时要手持毛面，擦拭干净外面的液体后，再放入比色槽内。
（12）测定前应确保紫外－可见分光光度计能够正常使用。①要配备合适的稳压器，并接地线，使电压稳定，周围无扰动干扰。②光路要对正。可先在比色槽内不放比色皿，检查其吸光度是否一致，不一致的要进行调整。③要先遇热30min，再测定吸光度。
（13）测定时刷洗干净的比色皿，要先用待测试液冲刷几遍，再倒入待测试液测定吸光度（若此时仍有小的CO2气泡，要用手指轻弹出后再测定）；测定后倒出试液，用纯水冲刷几遍，再倒入下一个待测试液（要先用该试液冲刷后）进行测定。
（14）据资料介绍，可采用紫外－可见分光光度计，在波长880nm 处比色，测定吸光度，而不必使用活性炭进行脱色，以减少劳动量。但在实际测定中，若不加入1g 无磷活性炭，在波长700nm 处比色，测定结果偏低。
（15）如果土壤有效磷含量较高，可吸取5.00mL 浸提溶液，另外再吸取5.00mL 碳酸氢钠浸提剂，以保持显色时溶液的酸度。计算结果按所取浸提液的分取倍数计算。
（16）每批样品进行测定，要做空白试验、平行试验，并带一个参比样（参比样可自制）。以检测测定结果的准确性，不准确的要查找原因，重做。
（17）要做好土样称取、过滤、吸取转移、测定结果的纪录，并且每一项操作都要认真核对，避免人为出错。
❼ 为什么用钼锑抗法测定活性污泥中的林
为什么用钼锑抗法测定活性污泥中
微量磷的测定一般采用磷钼蓝或钼锑钪光度法.磷钼蓝是将磷酸与钼酸铵在酸性条件下生成黄色磷钼杂多酸,然后用还原剂将黄色的磷钼杂多酸还原成磷钼杂多蓝,进行测定.常用的还原剂有氯化亚锡、硫酸联氨、抗坏血酸等.用硫酸联氨和抗坏血酸作还原剂时,反应速度慢,且需沸水浴加热,操作较麻烦；用氯化亚锡作还原剂,灵敏度高,显色快,但蓝色的稳定性稍差,对酸度和钼酸铵浓度的控制要求严格；若用抗坏血酸加酒石酸锑钾作还原剂,也可以使磷钼杂多酸转化成稳定的蓝色溶液,此法称为钼锑钪法.
钼锑钪法操作实例：
森林土壤有效磷的测定
1 0.05mol/L HCl-0.025mol/L 1/2H2So4浸提法
本方法适用于质地较轻的酸性森林土壤中有效磷测定.
1.1 方法要点
以0.05mol/L HCl-0.025mol/L 1/2H2So4溶液浸提酸性森林土壤样品,使这类土壤中比较具有活性的磷酸铁、铝盐陆续被溶解释放.
1.2 试剂
① 双酸浸提剂（0.05mol/L HCl-0.025mol/L 1/2H2So4） ：吸取4.0ml浓盐酸（分析纯）及0.7ml浓硫酸（分析纯）于有水的1L容量瓶中,用水稀释至标度.
② 1%高锰酸钾溶液：1g高锰酸钾（KMnO4,分析纯）加100ml水.
③ 0.5％草酸溶液：0.5g草酸（H2C2O4,分析纯）加水100ml.
④ 2,4－二硝基酚（或2,6－二硝基酚）指示剂：溶解0.20g2,4－二硝基酚于100ml 95％乙醇中.
⑤ 2mol/L氢氧化钠溶液：80.0g氢氧化钠溶于水,用水定容到1L.
⑥ 0.5mol/L硫酸溶液：吸取28.0ml浓硫酸,缓缓注入于水中,用水定容至1L.
⑦ 钼锑贮存液：153ml浓硫酸,缓慢地到入约400ml水中,搅拌,冷却.另取10g钼酸铵,溶解于约60℃的300ml水中,冷却.然后将硫酸溶液缓缓到入钼酸铵溶液中,再加入100ml10.5％酒石酸锑钾溶液,最后用水稀释至1L,避光保存.此贮存液含1％钼酸铵、2.75mol/L硫酸.
⑧ 钼锑钪显色剂：1.50g抗坏血酸溶于100ml钼锑贮存液中.此液须随配随用.
⑨ 5ppm磷标准溶液：0.4394g在50℃烘干的磷酸二氢钾,加100ml水,加5ml浓硫酸（防腐）,用水定容到1L,浓度为100ppm磷,此溶液可以长期保存.吸取上述溶液10ml于200ml容量瓶中,加水至标度,浓度为5ppm磷标准溶液,此溶液不宜久存.
❽ 测土壤磷中，配制的钼锑储存液(放在棕色瓶)，可以存放多久
钼锑储存液，在棕色试剂瓶中，密封，且在4℃下，可以存放2个月以上。至于是2个月零几天，这个不敢说，为保险起见，超过两个月就别用了，重新配吧，样品制备那么难，因为试剂而浪费，太亏了。抗坏血酸，要现配现用，一定记住。
❾ 如何配制5+1硫酸-高氯酸
方法原理在高温条件下，土壤中含磷矿物及有机磷化合物与高沸点的硫酸和强氧化剂高氯酸作用，使之完全分解，全部转化为正磷酸盐而进入溶液，然后用钼锑抗比色法测定。操作步骤1.在分析天平上准确称取通过100目筛(孔径为0.25mm)的土壤样品1g(精确到0.0001)置于50ml三角瓶中，以少量水湿润，并加入浓H2SO48ml，摇动后(最好放置过夜)再加入70—72%的高氯酸(HClO4)10滴摇匀。2.于瓶口上放一小漏斗，置于电炉上加热消煮至瓶内溶液开始转白后，继续消煮20分钟，全部消煮时间约为45—60分钟。3.将冷却后的消煮液用水小心地洗入100ml容量瓶中，冲冼时用水应少量多次。轻轻摇动容量瓶，待完全冷却后，用水定容，用干燥漏斗和无磷滤纸将溶液滤入干燥的100ml三角瓶中。同时做空白试验。4.吸取滤液2—10ml于50ml容量瓶中，用水稀释至30ml，加二硝基酚指示剂2滴，用稀氢氧化钠(NaOH)溶液和稀硫酸(H2SO4)溶液调节pH至溶液刚呈微黄色。5.加入钼锑抗显色剂5ml，摇匀，用水定容至刻度。6.在室温高于15℃的条件下放置30分钟后，在分光光度计上以700nm的波长比色，以空白试验溶液为参比液调零点，读取吸收值，在工作曲线上查出显色液的P—mg/L数。7.工作曲线的绘制。分别吸取5mg/L标准溶液0，1，2，3，4，5，6ml于50ml容量瓶中，加水稀释至约30ml，加入钼锑抗显色剂5ml,摇匀定容。即得0，0.1,0.2,0.3,0.4,0.5,0.6,mg/LP标准系列溶液，与待测溶液同时比色，读取吸收值。在方格坐标纸上以吸收值为纵坐标，Pmg/L数为横坐标，绘制成工作曲线。结果计算全P %=显色液mg/L×显色液体积×分取倍数／(W×106)×100式中：显色液Pmg/L—从工作曲线上查得的Pmg/L；显色液体积—本操作中为50ml；分取倍数—消煮溶液定容体积/吸取消煮溶液体积；106—将ug换算成gW—土样重(g)。两次平行测定结果允许误差为0.005%。仪器、试剂1.主要仪器：分析天平、小漏斗、大漏斗、三角瓶(50ml和100ml)、容量瓶(50ml和100ml)、移液管(5ml和10ml)、电炉、分光光度计。2.试剂：(1)0.5mol/L碳酸氢钠浸提液。称取化学纯碳酸氢钠42.0g溶于800ml水中，以0.5mol/L氢氧化钠调节pH至8.5，洗入1000ml容量瓶中，定容至刻度，贮存于试剂瓶中。此溶液贮存于塑料瓶中比在玻璃瓶中容易保存，若贮存超过1个月，应检查pH值是否改变。(2)无磷活性炭。活性碳常常含有磷，应做空白试验，检查有无磷存在。如含磷较多，须先用2mol/L盐酸浸泡过夜，用蒸馏水冲洗多次后，再用0.5mol/L碳酸氢钠浸泡过夜，在平瓷漏斗上抽气过滤，每次用少量蒸馏水淋洗多次，并检查到无磷为止。如含磷较少，则直接用碳酸氢钠处理即可。(3)磷(P)标准溶液。准确称取45℃烘干4—8小时的分析纯磷酸二氢钾0.2197g于小烧杯中，以少量水溶解，将溶液全部洗入1000ml容量瓶中，用水定容至刻度，充分摇匀，此溶液即为含50mg/L的磷基准溶液。吸取50ml此溶液稀释至500ml，即为5mg/L的磷标准溶液(此溶液不能长期保存)。比色时按标准曲线系列配制。(4)硫酸钼锑贮存液。取蒸馏水约400ml，放入1000ml烧杯中，将烧杯浸在冷水中，然后缓缓注入分析纯浓硫酸208.3ml,并不断搅拌，冷却至室温。另称取分析纯钼酸铵20g溶于约60℃的200ml蒸馏水中，冷却。然后将硫酸溶液徐徐倒入钼酸铵溶液中，不断搅拌，再加入100ml0.5%酒石酸锑钾溶液，用蒸馏水稀释至1000ml，摇匀贮于试剂瓶中。(5)二硝基酚。称取0.25g二硝基酚溶于100ml蒸馏水中。(6)钼锑抗混合色剂。在100ml钼锑贮存液中，加入1.5g左旋(旋光度+21—+22°)抗坏血酸，此试剂有效期24小时，宜用前配制。