❶ 利用Mehlich3（M3）法，怎樣測定土壤浸出液中的有效磷
答：試劑配製
（1）鉬銻抗試劑
稱取酒石酸銻鉀［K（SbO）C4H4O6·1/2H2O，分析純］0.5克溶於100毫升去離子水中，配製成0.5%的溶液。另稱取鉬酸銨［（NH4）6Mo7O24·4H2O，Z分析純］10.0克溶於450毫升水中，慢慢地加入153毫升濃硫酸（分析純），邊加邊攪動。再將100毫升0.5%的酒石酸銻鉀溶液加入鉬酸銨溶液中，最後加水至1000毫升，充分搖勻，貯存於棕色瓶中，此為鉬銻貯備液。
在臨用前（當天），稱取抗壞血酸（即維生素C，分析純）7.5克，溶於500毫升鉬銻貯備液中，混勻此為鉬銻抗試劑，有效期24小時，如保存在冰箱中則有效期更長。上試劑中硫酸的濃度為5.5摩爾/升（1/2H2SO4），鉬酸銨為1%，酒石酸銻鉀為0.05%，抗壞血酸為1.5%。此溶液可供100樣次（方法一）或250樣次（方法二）使用。
（2）磷工作液［ρ（P）=5毫克/升］
稱取磷酸二氫鉀（KH2PO4，分析純，105℃烘乾2小時）0.2195克，置於400毫升去離子水中，加入濃硫酸5毫升（防長黴菌，可使溶液長期保存），轉入1000毫升容量瓶中，用水定容。此溶液為50毫克/升磷標准溶液。准確吸取此貯備液25毫升，稀釋至250毫升，即為5毫克/升磷標液（此溶液不宜久存）。
測定步驟 以下兩種方法任選其一。
方法一：用移液管或加樣槍准確吸取2.00～10.00毫升土壤浸出液（依肥力水平而異）於50毫升容量瓶中，加水至約30毫升，加入5.00毫升鉬銻抗試劑顯色，定容搖勻［注釋5］。顯色30分鍾後，在880納米處比色。如冬季氣溫較低時，注意保持顯色時溫度在15℃以上，最好在恆溫室內顯色，以加快顯色速度。測定的同時做空白校正［注釋6］。
方法二：用加樣槍准確吸取1.00毫升土壤浸出液於50毫升塑料瓶中，用溶液分配器准確加水17.0毫升，再用加樣槍准確加入2.00毫升鉬銻抗試劑顯色，搖勻，顯色30分鍾後，在880納米處比色。冬季氣溫低時，保溫措施同方法一。測定的同時做空白試驗校正。該法速度快，浸出試液用量少，試劑用量也少，計算簡單。
工作曲線：准確吸取5毫克/升 P標准溶液0、0.5、1.00、2.00、4.00、6.00毫升，分別放入50毫升容量瓶中，加水至約30毫升，加入5.00毫升鉬銻抗試劑顯色，定容搖勻，即得0、0.05、0.1、0.2、0.4、0.6毫克/升 P標准系列溶液。顯色30分鍾後，在880納米處比色。
結果計算
方法一：土壤M3-P ω（P）=ρ（P）×V×D/m
式中：ω（P）——土壤有效磷（M3-P）的質量分數（毫克/千克）；
ρ（P）——待測液中P濃度（毫克/升）；
V——顯色液體積（毫升）；
D——分取倍數，浸出液體積/吸取濾液體積；
M——風干土樣質量（克）。
方法二：簡化計算公式為
ω（P）=ρ（P）×200
❷ 測定速效磷過濾時溶液發黃是怎麼回事
1—4土壤中氮的測定(全氮、速效氮)1—4.1土壤全氮量的測定(重鉻酸鉀—硫酸消化法)。土壤含氮量的多少及其存在狀態，常與作物的產量在某一條件下有一定的正相關，從目前我國土壤肥力狀況看，80%左右的土壤都缺乏氮素。因此，了解土壤全氮量，可作為施肥的參考，以便指導施肥達到增產效果。方法原理土壤與濃硫酸及還原性催化劑共同加熱，使有機氮轉化成氨，並與硫酸結合成硫酸銨；無機的銨態氮轉化成硫酸銨；極微量的硝態氮在加熱過程中逸出損失；有機質氧化成CO2。樣品消化後，再用濃鹼蒸餾，使硫酸銨轉化成氨逸出，並被硼酸所吸收，最後用標准酸滴定。主要反應可用下列方程式表示：NH2·CH2CO·NH-CH2COOH+H2SO4=2NH2-CH2COOH+SO2+［O］NH2-CH2COOH+3H2SO4=NH3+2CO2↑+3SO2↑+4H2O2NH2-CH2COOH+2K2Cr2O7+9H2SO4=(NH4)2SO4+2K2SO4+2Cr2(SO4)3+4CO2↑+10H2O(NH4)2SO4＋2NaOH=Na2SO4+2H2O+2NH3↑NH3+H3BO3=H3BO3·NH3H3BO3·NH3+HCl=H3BO3+NH4Cl操作步驟1.在分析天平上稱取通過60號篩(孔徑為0.25mm)的風干土壤樣品0.5—1g(精確到0.001g)，然後放入150ml開氏瓶中。2.加濃硫酸(H2SO4)5ml，並在瓶口加一隻彎頸小漏斗，然後放在調溫電爐上高溫消煮15分鍾左右，使硫酸大量冒煙，當看不到黑色碳粒存在時即可(如果有機質含量超過5%時，應加1—2g焦硫酸鉀，以提高溫度加強硫酸的氧化能力)。3.待冷卻後，加5ml飽和重鉻酸鉀溶液，在電爐上微沸5分鍾，這時切勿使硫酸發煙。4.消化結束後，在開氏瓶中加蒸餾水或不含氮的自來水70ml，搖勻後接在蒸餾裝置上，再用筒形漏斗通過Y形管緩緩加入40%氫氧化鈉(NaOH)25ml。5.將一三角瓶接在冷凝管的下端，並使冷凝管浸在三角瓶的液面下，三角瓶內盛有25ml2%硼酸吸收液和定氮混合指示劑1滴。6.將螺絲夾打開(蒸汽發生器內的水要預先加熱至沸)，通入蒸汽，並打開電爐和通自來水冷凝。7.蒸餾20分鍾後，檢查蒸餾是否完全。檢查方法：取出三角瓶，在冷凝管下端取1滴蒸出液於白色瓷板上，迦納氏試劑1滴，如無黃色出現，即表示蒸餾完全，否則應繼續蒸餾，直到蒸餾完全為止(或用紅色石蕊試紙檢驗)。8.蒸餾完全後，降低三角瓶的位置，使冷凝管的下端離開液面，用少量蒸餾水沖洗冷凝的管的下端(洗入三角瓶中)，然後用0.02mol/L鹽酸(HCl)標准液滴定，溶液由藍色變為酒紅色時即為終點。記下消耗標准鹽酸的毫升數。測定時同時要做空白試驗，除不加試樣外，其它操作相同。結果計算N%=[(V-V0)×N×0.014]／樣品重×100式中：V—滴定時消耗標准鹽酸的毫升數；V0—滴定空白時消耗標准鹽酸的毫升數；N—標准鹽酸的摩爾濃度；0.014—氮原子的毫摩爾質量g/mmol；100—換算成百分數。注意事項1.在使用蒸餾裝置前，要先空蒸5分鍾左右，把蒸汽發生器及蒸餾系統中可能存在的含氮雜質去除干凈，並用納氏試劑檢查。2.樣品經濃硫酸消煮後須充分冷卻，然後再加飽和重鉻酸鉀溶液，否則作用非常激烈，易使樣品濺出。加入重鉻酸鉀後，如果溶液出現綠色，或消化1—2分鍾後即變綠色，這說明重鉻酸鉀量不足，在這種情況下，可補加1g固體重鉻酸鉀(K2Cr2O7)，然後繼續消化。3.若蒸餾產生倒吸現象，可再補加硼酸吸收液，仍可繼續蒸餾。4.在蒸餾過程中必須冷凝充分，否則會使吸收液發熱，使氨因受熱而揮發，影響測定結果。5.蒸餾時不要使開氏瓶內溫度太低，使蒸氣充足，否則易出現倒吸現象。另外，在實驗結束時要先取下三角瓶，然後停止加熱，或降低三角瓶使冷凝管下端離開液面。儀器、試劑1.主要儀器：開氏瓶(150ml)、彎頸小漏斗、分析天平、電爐、普通定氮蒸餾裝置。2.試劑：(1)濃硫酸(化學純，比重1.84)。(2)飽和重鉻酸鉀溶液。稱取200g(化學純)重鉻酸鉀溶於1000ml熱蒸餾水中。(3)40%氫氧化鈉(NaOH)溶液。稱取工業用氫氧化鈉(NaOH)400g，加水溶解不斷攪拌，再稀釋定容至1000ml貯於塑料瓶中。(4)2%硼酸溶液。稱取20g硼酸加入熱蒸餾水(60℃)溶解，冷卻後稀釋定容至1000ml，最後用稀鹽酸(HCl)或稀氫氧化鈉(NaOH)調節pH至4.5(定氮混合指示劑顯葡萄酒紅色)。(5)定氮混合指示劑。稱取0.1g甲基紅和0.5g溴甲酚綠指示劑放入瑪瑙研缽中，加入100ml95%酒精研磨溶解，此液應用稀鹽酸(HCl)或氫氧化鈉(NaOH)調節pH至4.5。(6)0.02mol/L鹽酸標准溶液。取濃鹽酸(HCl)(比重1.19)1.67ml，用蒸餾水稀釋定容至1000ml，然後用標准鹼液或硼砂標定。(7)鈉氏試劑(定性檢查用)。稱氫氧化鉀(KOH)134g溶於460ml蒸餾水中；稱取碘化鉀(KI)20g溶於50ml蒸餾水中，加碘化汞(HgI)使溶液至飽和狀態(大約32g左右)。然後將以上兩種溶液混合即成。1—4.2土壤水解性氮的測定(鹼解擴散法)土壤水解性氮，包括礦質態氮和有機態氮中比較易於分解的部分。其測定結果與作物氮素吸收有較好的相關性。測定土壤中水解性氮的變化動態，能及時了解土壤肥力，指導施肥。測定原理在密封的擴散皿中，用1.8mol/L氫氧化鈉(NaOH)溶液水解土壤樣品，在恆溫條件下使有效氮鹼解轉化為氨氣狀態，並不斷地擴散逸出，由硼酸(H3BO3)吸收，再用標准鹽酸滴定，計算出土壤水解性氮的含量。旱地土壤硝態氮含量較高，需加硫酸亞鐵使之還原成銨態氮。由於硫酸亞鐵本身會中和部分氫氧化鈉，故需提高鹼的濃度(1.8mol/L，使鹼保持1.2mol/L的濃度)。水稻土壤中硝態氮含量極微，可以省去加硫酸亞鐵，直接用1.2mol/L氫氧化鈉水解。操作步驟1.稱取通過18號篩(孔徑1mm)風干樣品2g(精確到0.001g)和1g硫酸亞鐵粉劑，均勻鋪在擴散皿外室內，水平地輕輕旋轉擴散皿，使樣品鋪平。(水稻土樣品則不必加硫酸亞鐵。)2.用吸管吸取2%硼酸溶液2ml，加入擴散皿內室，並滴加1滴定氮混合指示劑，然後在皿的外室邊緣塗上特製膠水，蓋上毛玻璃，並旋轉數次，以便毛玻璃與皿邊完全粘合，再慢慢轉開毛玻璃的一邊，使擴散皿露出一條狹縫，迅速用移液管加入10ml1.8mol/L氫氧化鈉於皿的外室(水稻土樣品則加入10ml1.2mol/L氫氧化鈉)，立即用毛玻璃蓋嚴。3.水平輕輕旋轉擴散皿，使鹼溶液與土壤充分混合均勻，用橡皮筋固定，貼上標簽，隨後放入40℃恆溫箱中。24小時後取出，再以0.01mol/LHCl標准溶液用微量滴定管滴定內室所吸收的氮量，溶液由藍色滴至微紅色為終點，記下鹽酸用量毫升數V。同時要做空白試驗，滴定所用鹽酸量為V0。結果計算水解性氮(mg/100g土)=N×(V-V0)×14／樣品重×100式中：N—標准鹽酸的摩爾濃度；V—滴定樣品時所用去的鹽酸的毫升數；V0—空白試驗所消耗的標准鹽酸的毫升數；14—一個氮原子的摩爾質量mg/mol；100—換算成每百克樣品中氮的毫克數。注意事項(1)滴定前首先要檢查滴定管的下端是否充有氣泡。若有，首先要把氣泡排出。(2)滴定時，標准酸要逐滴加入，在接近終點時，用玻璃棒從滴定管尖端沾取少量標准酸滴入擴散皿內。(3)特製膠水一定不能沾污到內室，否則測定結果將會偏高。(4)擴散皿在抹有特製膠水後必須蓋嚴，以防漏氣。主要儀器擴散皿、微量滴定管、1/1000分析天平、恆溫箱、玻璃棒毛玻璃、皮筋、吸管(2ml和10ml)，臘光紙、角匙、瓷盤。試劑(1)1.8mol/L氫氧化鈉溶液。稱取化學純氫氧化鈉72g，用蒸餾水溶解後冷卻定容到1000ml。(2)1.2mol/L氫氧化鈉溶液。稱取化學純氫氧化鈉48g,用蒸餾水溶解定容到1000ml。(3)2%硼酸溶液。稱取20g硼酸，用熱蒸餾水(約60℃)溶解，冷卻後稀釋至1000ml，用稀鹽酸或稀氫氧化鈉調節pH至4.5(定氮混合指示劑顯葡萄酒紅色)。(4)0.01mol/L鹽酸標准溶液。先配製1.0mol/L鹽酸溶液，然後稀釋100倍，用標准鹼標定。(5)定氮混合指示劑。與土壤全氮的測定配法相同。(6)特製膠水。阿拉伯膠(稱取10g粉狀阿拉伯膠，溶於15ml蒸餾水中)10份、甘油10份，飽和碳酸鉀5份混合即成(最好放置在盛有濃硫酸的乾燥器中以除去氨)。(7)硫酸亞鐵(粉狀)。將分析純硫酸亞鐵磨細保存於陰涼乾燥處。1—5土壤中磷的測定(全磷、速效磷)1—5.1土壤全磷的測定(硫酸一高氯酸消煮法)方法原理在高溫條件下，土壤中含磷礦物及有機磷化合物與高沸點的硫酸和強氧化劑高氯酸作用，使之完全分解，全部轉化為正磷酸鹽而進入溶液，然後用鉬銻抗比色法測定。操作步驟1.在分析天平上准確稱取通過100目篩(孔徑為0.25mm)的土壤樣品1g(精確到0.0001)置於50ml三角瓶中，以少量水濕潤，並加入濃H2SO48ml，搖動後(最好放置過夜)再加入70—72%的高氯酸(HClO4)10滴搖勻。2.於瓶口上放一小漏斗，置於電爐上加熱消煮至瓶內溶液開始轉白後，繼續消煮20分鍾，全部消煮時間約為45—60分鍾。3.將冷卻後的消煮液用水小心地洗入100ml容量瓶中，沖冼時用水應少量多次。輕輕搖動容量瓶，待完全冷卻後，用水定容，用乾燥漏斗和無磷濾紙將溶液濾入乾燥的100ml三角瓶中。同時做空白試驗。4.吸取濾液2—10ml於50ml容量瓶中，用水稀釋至30ml，加二硝基酚指示劑2滴，用稀氫氧化鈉(NaOH)溶液和稀硫酸(H2SO4)溶液調節pH至溶液剛呈微黃色。5.加入鉬銻抗顯色劑5ml，搖勻，用水定容至刻度。6.在室溫高於15℃的條件下放置30分鍾後，在分光光度計上以700nm的波長比色，以空白試驗溶液為參比液調零點，讀取吸收值，在工作曲線上查出顯色液的P—mg/L數。7.工作曲線的繪制。分別吸取5mg/L標准溶液0，1，2，3，4，5，6ml於50ml容量瓶中，加水稀釋至約30ml，加入鉬銻抗顯色劑5ml,搖勻定容。即得0，0.1,0.2,0.3,0.4,0.5,0.6,mg/LP標准系列溶液，與待測溶液同時比色，讀取吸收值。在方格坐標紙上以吸收值為縱坐標，Pmg/L數為橫坐標，繪製成工作曲線。結果計算全P%=顯色液mg/L×顯色液體積×分取倍數／(W×106)×100式中：顯色液Pmg/L—從工作曲線上查得的Pmg/L；顯色液體積—本操作中為50ml；分取倍數—消煮溶液定容體積/吸取消煮溶液體積；106—將ug換算成gW—土樣重(g)。兩次平行測定結果允許誤差為0.005%。儀器、試劑1.主要儀器：分析天平、小漏斗、大漏斗、三角瓶(50ml和100ml)、容量瓶(50ml和100ml)、移液管(5ml和10ml)、電爐、分光光度計。2.試劑：(1)0.5mol/L碳酸氫鈉浸提液。稱取化學純碳酸氫鈉42.0g溶於800ml水中，以0.5mol/L氫氧化鈉調節pH至8.5，洗入1000ml容量瓶中，定容至刻度，貯存於試劑瓶中。此溶液貯存於塑料瓶中比在玻璃瓶中容易保存，若貯存超過1個月，應檢查pH值是否改變。(2)無磷活性炭。活性碳常常含有磷，應做空白試驗，檢查有無磷存在。如含磷較多，須先用2mol/L鹽酸浸泡過夜，用蒸餾水沖洗多次後，再用0.5mol/L碳酸氫鈉浸泡過夜，在平瓷漏鬥上抽氣過濾，每次用少量蒸餾水淋洗多次，並檢查到無磷為止。如含磷較少，則直接用碳酸氫鈉處理即可。(3)磷(P)標准溶液。准確稱取45℃烘乾4—8小時的分析純磷酸二氫鉀0.2197g於小燒杯中，以少量水溶解，將溶液全部洗入1000ml容量瓶中，用水定容至刻度，充分搖勻，此溶液即為含50mg/L的磷基準溶液。吸取50ml此溶液稀釋至500ml，即為5mg/L的磷標准溶液(此溶液不能長期保存)。比色時按標准曲線系列配製。(4)硫酸鉬銻貯存液。取蒸餾水約400ml，放入1000ml燒杯中，將燒杯浸在冷水中，然後緩緩注入分析純濃硫酸208.3ml,並不斷攪拌，冷卻至室溫。另稱取分析純鉬酸銨20g溶於約60℃的200ml蒸餾水中，冷卻。然後將硫酸溶液徐徐倒入鉬酸銨溶液中，不斷攪拌，再加入100ml0.5%酒石酸銻鉀溶液，用蒸餾水稀釋至1000ml，搖勻貯於試劑瓶中。(5)二硝基酚。稱取0.25g二硝基酚溶於100ml蒸餾水中。(6)鉬銻抗混合色劑。在100ml鉬銻貯存液中，加入1.5g左旋(旋光度+21—+22°)抗壞血酸，此試劑有效期24小時，宜用前配製。1—5.2土壤中速效磷的測定(碳酸氫鈉法)了解土壤中速效磷供應狀況，對於施肥有著直接的指導意義。土壤速效磷的測定方法很多，由於提取劑的不同所得的結果也不一致。提取劑的選擇主要根據各種土壤性質而定，一般情況下，石灰性土壤和中性土壤採用碳酸氫鈉來提取，酸性土壤採用酸性氟化銨或氫氧化鈉—草酸鈉法來提取。方法原理石灰性土壤由於大量游離碳酸鈣存在，不能用酸溶液來提取速效磷，可用碳酸鹽的鹼溶液。由於碳酸根的同離子效應，碳酸鹽的鹼溶液降低碳酸鈣的溶解度，也就降低了溶液中鈣的濃度，這樣就有利於磷酸鈣鹽的提取。同時由於碳酸鹽的鹼溶液也降低了鋁和鐵離子的活性，有利於磷酸鋁和磷酸鐵的提取。此外，碳酸氫鈉鹼溶液中存在著OH-、HCO-3、CO2-3等陰離子有利於吸附態磷的交換，因此，碳酸氫鈉不僅適用於石灰性土壤，也適用於中性和酸性土壤中速效磷的提取。待測液用鉬銻抗混合顯色劑在常溫下進行還原，使黃色的銻磷鉬雜多酸還原成為磷鉬藍進行比色。操作步驟：1.稱取通過18號篩(孔徑為1mm)的風干土樣5g(精確到0.01g)於200ml三角瓶中，准確加入0.5mol/L碳酸氫鈉溶液100ml,再加一小角勺無磷活性碳，塞緊瓶塞，在振盪機上振盪30分鍾(振盪機速率為每分鍾150—180次)，立即用無磷濾紙干過濾，濾液承接於100ml三角瓶中。最初7～8ml濾液棄去。2.吸取濾液10ml(含磷量高時吸取2.5—5ml；同時應補加0.5mol/L碳酸氫鈉溶液至10ml)於50ml量瓶中，加硫酸鉬銻抗混合顯色劑5ml充分搖勻，排出二氧化碳後加水定容至刻度，再充分搖勻。3.30分鍾後，在分光光度計上比色(波長660nm)，比色時須同時做空白測定。4.磷標准曲線繪制：分別吸取5mg/L磷標准溶液0、1、2、3、4、5ml於50ml容量瓶中，每一容量瓶即為0、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5mg/L磷，再逐個加入0.5mol/L碳酸氫鈉10ml和硫酸一鉬銻抗混合顯色劑5ml，然後同待測液一樣進行比色。繪制標准曲線。結果計算土壤速效Pmg/kg=比色液mg/L×定容體積/W×分取倍數式中：比色液mg/L—從工作曲線上查得的比色液磷的mg/L數；W—稱取土樣重量(g)。分取倍數—100/10土壤速效磷(P)mg/kg等級＜5低5—10中＞10高注意事項1.活性碳一定要洗至無磷無氯反應。2.鉬銻抗混合劑的加入量要十分准確，特別是鉬酸量的大小，直接影響著顯色的深淺和穩定性。標准溶液和待測液的比色酸度應保持基本一致，它的加入量應隨比色時定容體積的大小按比例增減。3.溫度的大小影響著測定結果。提取時要求溫度在25℃左右。室溫太低時，可將容量瓶放入40—50℃的烘箱或熱水中保溫20分鍾，稍冷後方可比色儀器葯品1.主要儀器：往復振盪機、電子天平(1/100)、分光光度計、三角瓶(250ml和100ml)、燒杯(100ml)、移液管(10ml、50ml)、容量瓶(50ml)、吸耳球、漏斗(60ml)、濾紙、坐標紙、擦鏡紙、小滴管。2.試劑配製：見1—5.1。
❸ 哪位老師能告訴我土壤中有效氮、有效磷、有效鉀的測定方法感激不盡.......
1—4 土壤中氮的測定(全氮、速效氮)
1—4.1 土壤全氮量的測定(重鉻酸鉀—硫酸消化法)。
土壤含氮量的多少及其存在狀態，常與作物的產量在某一條件下有一定的正相關，從目前我國土壤肥力狀況看，80%左右的土壤都缺乏氮素。因此，了解土壤全氮量，可作為施肥的參考，以便指導施肥達到增產效果。
方法原理
土壤與濃硫酸及還原性催化劑共同加熱，使有機氮轉化成氨，並與硫酸結合成硫酸銨；無機的銨態氮轉化成硫酸銨；極微量的硝態氮在加熱過程中逸出損失；有機質氧化成CO2。樣品消化後，再用濃鹼蒸餾，使硫酸銨轉化成氨逸出，並被硼酸所吸收，最後用標准酸滴定。主要反應可用下列方程式表示：
NH2·CH2CO·NH-CH2COOH+H2SO4=2NH2-CH2COOH+SO2+［O］
NH2-CH2COOH+3H2SO4=NH3+2CO2↑+3SO2↑+4H2O
2NH2-CH2COOH+2K2Cr2O7+9H2SO4=(NH4)2SO4+2K2SO4+2Cr2(SO4)3+4CO2↑+10H2O
(NH4)2SO4＋2NaOH=Na2SO4+2H2O+2NH3↑
NH3+H3BO3=H3BO3·NH3
H3BO3·NH3+HCl=H3BO3+NH4Cl
操作步驟
1.在分析天平上稱取通過60號篩(孔徑為0.25mm)的風干土壤樣品0.5—1g(精確到0.001g)，然後放入150ml開氏瓶中。
2.加濃硫酸(H2SO4)5ml，並在瓶口加一隻彎頸小漏斗，然後放在調溫電爐上高溫消煮15分鍾左右，使硫酸大量冒煙，當看不到黑色碳粒存在時即可(如果有機質含量超過5%時，應加1—2g焦硫酸鉀，以提高溫度加強硫酸的氧化能力)。
3.待冷卻後，加5ml飽和重鉻酸鉀溶液，在電爐上微沸5分鍾，這時切勿使硫酸發煙。
4.消化結束後，在開氏瓶中加蒸餾水或不含氮的自來水70ml，搖勻後接在蒸餾裝置上，再用筒形漏斗通過Y形管緩緩加入40%氫氧化鈉(NaOH)25ml。
5.將一三角瓶接在冷凝管的下端，並使冷凝管浸在三角瓶的液面下，三角瓶內盛有25ml 2%硼酸吸收液和定氮混合指示劑1滴。
6.將螺絲夾打開(蒸汽發生器內的水要預先加熱至沸)，通入蒸汽，並打開電爐和通自來水冷凝。
7.蒸餾20分鍾後，檢查蒸餾是否完全。檢查方法：取出三角瓶，在冷凝管下端取1滴蒸出液於白色瓷板上，迦納氏試劑1滴，如無黃色出現，即表示蒸餾完全，否則應繼續蒸餾，直到蒸餾完全為止(或用紅色石蕊試紙檢驗)。
8.蒸餾完全後，降低三角瓶的位置，使冷凝管的下端離開液面，用少量蒸餾水沖洗冷凝的管的下端(洗入三角瓶中)，然後用0.02mol/L鹽酸(HCl)標准液滴定，溶液由藍色變為酒紅色時即為終點。記下消耗標准鹽酸的毫升數。
測定時同時要做空白試驗，除不加試樣外，其它操作相同。
結果計算
N%=[ (V-V0)×N×0.014]／樣品重×100
式中：
V—滴定時消耗標准鹽酸的毫升數；
V0—滴定空白時消耗標准鹽酸的毫升數；
N—標准鹽酸的摩爾濃度；
0.014—氮原子的毫摩爾質量g/mmol；
100—換算成百分數。
注意事項
1.在使用蒸餾裝置前，要先空蒸5分鍾左右，把蒸汽發生器及蒸餾系統中可能存在的含氮雜質去除干凈，並用納氏試劑檢查。
2.樣品經濃硫酸消煮後須充分冷卻，然後再加飽和重鉻酸鉀溶液，否則作用非常激烈，易使樣品濺出。加入重鉻酸鉀後，如果溶液出現綠色，或消化1—2分鍾後即變綠色，這說明重鉻酸鉀量不足，在這種情況下，可補加1g固體重鉻酸鉀(K2Cr2O7)，然後繼續消化。
3.若蒸餾產生倒吸現象，可再補加硼酸吸收液，仍可繼續蒸餾。
4.在蒸餾過程中必須冷凝充分，否則會使吸收液發熱，使氨因受熱而揮發，影響測定結果。
5.蒸餾時不要使開氏瓶內溫度太低，使蒸氣充足，否則易出現倒吸現象。另外，在實驗結束時要先取下三角瓶，然後停止加熱，或降低三角瓶使冷凝管下端離開液面。
儀器、試劑
1.主要儀器：開氏瓶(150ml)、彎頸小漏斗、分析天平、電爐、普通定氮蒸餾裝置。
2.試劑：
(1) 濃硫酸(化學純，比重1.84)。
(2)飽和重鉻酸鉀溶液。稱取200g(化學純)重鉻酸鉀溶於1000ml熱蒸餾水中。
(3)40%氫氧化鈉(NaOH)溶液。稱取工業用氫氧化鈉(NaOH)400g，加水溶解不斷攪拌，再稀釋定容至1000ml貯於塑料瓶中。
(4)2%硼酸溶液。稱取20g硼酸加入熱蒸餾水(60℃)溶解，冷卻後稀釋定容至1000ml，最後用稀鹽酸(HCl)或稀氫氧化鈉(NaOH)調節pH至4.5(定氮混合指示劑顯葡萄酒紅色)。
(5)定氮混合指示劑。稱取0.1g甲基紅和0.5g溴甲酚綠指示劑放入瑪瑙研缽中，加入100ml95%酒精研磨溶解，此液應用稀鹽酸(HCl)或氫氧化鈉(NaOH)調節pH至4.5。
(6)0.02mol/L鹽酸標准溶液。取濃鹽酸(HCl)(比重1.19)1.67ml，用蒸餾水稀釋定容至1000ml，然後用標准鹼液或硼砂標定。
(7)鈉氏試劑(定性檢查用)。稱氫氧化鉀(KOH)134g溶於460ml蒸餾水中；稱取碘化鉀(KI)20g溶於50ml蒸餾水中，加碘化汞(HgI)使溶液至飽和狀態(大約32g左右)。然後將以上兩種溶液混合即成。
1—4.2 土壤水解性氮的測定(鹼解擴散法)
土壤水解性氮，包括礦質態氮和有機態氮中比較易於分解的部分。其測定結果與作物氮素吸收有較好的相關性。測定土壤中水解性氮的變化動態，能及時了解土壤肥力，指導施肥。
測定原理
在密封的擴散皿中，用1.8mol/L氫氧化鈉(NaOH)溶液水解土壤樣品，在恆溫條件下使有效氮鹼解轉化為氨氣狀態，並不斷地擴散逸出，由硼酸(H3BO3)吸收，再用標准鹽酸滴定，計算出土壤水解性氮的含量。旱地土壤硝態氮含量較高，需加硫酸亞鐵使之還原成銨態氮 。由於硫酸亞鐵本身會中和部分氫氧化鈉，故需提高鹼的濃度(1.8mol/L，使鹼保持1.2mol/L的濃度)。水稻土壤中硝態氮含量極微，可以省去加硫酸亞鐵，直接用1.2mol/L氫氧化鈉水解。
操作步驟
1.稱取通過18號篩(孔徑1mm)風干樣品2g(精確到0.001g)和1g硫酸亞鐵粉劑，均勻鋪在擴散皿外室內，水平地輕輕旋轉擴散皿，使樣品鋪平。(水稻土樣品則不必加硫酸亞鐵。)
2.用吸管吸取2%硼酸溶液2ml，加入擴散皿內室，並滴加1滴定氮混合指示劑，然後在皿的外室邊緣塗上特製膠水，蓋上毛玻璃，並旋轉數次，以便毛玻璃與皿邊完全粘合，再慢慢轉開毛玻璃的一邊，使擴散皿露出一條狹縫，迅速用移液管加入10ml1.8mol/L氫氧化鈉於皿的外室(水稻土樣品則加入10ml1.2mol/L氫氧化鈉)，立即用毛玻璃蓋嚴。
3.水平輕輕旋轉擴散皿，使鹼溶液與土壤充分混合均勻，用橡皮筋固定，貼上標簽，隨後放入40℃恆溫箱中。24小時後取出，再以0.01mol/LHCl標准溶液用微量滴定管滴定內室所吸收的氮量，溶液由藍色滴至微紅色為終點，記下鹽酸用量毫升數V。同時要做空白試驗，滴定所用鹽酸量為V0。
結果計算
水解性氮(mg/100g土)= N×(V-V0)×14／樣品重×100
式中：
N—標准鹽酸的摩爾濃度；
V—滴定樣品時所用去的鹽酸的毫升數；
V0—空白試驗所消耗的標准鹽酸的毫升數；
14—一個氮原子的摩爾質量mg/mol；
100—換算成每百克樣品中氮的毫克數。
注意事項
(1)滴定前首先要檢查滴定管的下端是否充有氣泡。若有，首先要把氣泡排出。
(2)滴定時，標准酸要逐滴加入，在接近終點時，用玻璃棒從滴定管尖端沾取少量標准酸滴入擴散皿內。
(3)特製膠水一定不能沾污到內室，否則測定結果將會偏高。
(4)擴散皿在抹有特製膠水後必須蓋嚴，以防漏氣。
主要儀器
擴散皿、微量滴定管、1/1000分析天平、恆溫箱、玻璃棒 毛玻璃、皮筋、吸管(2ml和10ml)，臘光紙、角匙、瓷盤。
試劑
(1)1.8mol/L氫氧化鈉溶液。稱取化學純氫氧化鈉72g，用蒸餾水溶解後冷卻定容到1000ml。
(2)1.2mol/L氫氧化鈉溶液。稱取化學純氫氧化鈉48g,用蒸餾水溶解定容到1000ml。
(3)2%硼酸溶液。稱取20g硼酸，用熱蒸餾水(約60℃)溶解，冷卻後稀釋至1000ml，用稀鹽酸或稀氫氧化鈉調節pH至4.5(定氮混合指示劑顯葡萄酒紅色)。
(4)0.01mol/L鹽酸標准溶液。先配製1.0mol/L鹽酸溶液，然後稀釋100倍，用標准鹼標定。
(5)定氮混合指示劑。與土壤全氮的測定配法相同。
(6)特製膠水。阿拉伯膠(稱取10g粉狀阿拉伯膠，溶於15ml蒸餾水中)10份、甘油10份，飽和碳酸鉀5份混合即成(最好放置在盛有濃硫酸的乾燥器中以除去氨)。
(7)硫酸亞鐵(粉狀)。將分析純硫酸亞鐵磨細保存於陰涼乾燥處。
1—5 土壤中磷的測定(全磷、速效磷)
1—5.1 土壤全磷的測定(硫酸一高氯酸消煮法)
方法原理
在高溫條件下，土壤中含磷礦物及有機磷化合物與高沸點的硫酸和強氧化劑高氯酸作用，使之完全分解，全部轉化為正磷酸鹽而進入溶液，然後用鉬銻抗比色法測定。
操作步驟
1.在分析天平上准確稱取通過100目篩(孔徑為0.25mm)的土壤樣品1g(精確到0.0001)置於50ml三角瓶中，以少量水濕潤，並加入濃H2SO48ml，搖動後(最好放置過夜)再加入70—72%的高氯酸(HClO4)10滴搖勻。
2.於瓶口上放一小漏斗，置於電爐上加熱消煮至瓶內溶液開始轉白後，繼續消煮20分鍾，全部消煮時間約為45—60分鍾。
3.將冷卻後的消煮液用水小心地洗入100ml容量瓶中，沖冼時用水應少量多次。輕輕搖動容量瓶，待完全冷卻後，用水定容，用乾燥漏斗和無磷濾紙將溶液濾入乾燥的100ml三角瓶中。同時做空白試驗。
4.吸取濾液2—10ml於50ml容量瓶中，用水稀釋至30ml，加二硝基酚指示劑2滴，用稀氫氧化鈉(NaOH)溶液和稀硫酸(H2SO4)溶液調節pH至溶液剛呈微黃色。
5.加入鉬銻抗顯色劑5ml，搖勻，用水定容至刻度。
6.在室溫高於15℃的條件下放置30分鍾後，在分光光度計上以700nm的波長比色，以空白試驗溶液為參比液調零點，讀取吸收值，在工作曲線上查出顯色液的P—mg/L數。
7.工作曲線的繪制。分別吸取5mg/L標准溶液0，1，2，3，4，5，6ml於50ml容量瓶中，加水稀釋至約30ml，加入鉬銻抗顯色劑5ml,搖勻定容。即得0，0.1,0.2,0.3,0.4,0.5,0.6,mg/LP標准系列溶液，與待測溶液同時比色，讀取吸收值。在方格坐標紙上以吸收值為縱坐標，Pmg/L數為橫坐標，繪製成工作曲線。
結果計算
全P %=顯色液mg/L×顯色液體積×分取倍數／(W×106)×100
式中：
顯色液Pmg/L—從工作曲線上查得的Pmg/L；
顯色液體積—本操作中為50ml；
分取倍數—消煮溶液定容體積/吸取消煮溶液體積；
106—將ug換算成g
W—土樣重(g)。
兩次平行測定結果允許誤差為0.005%。
儀器、試劑
1.主要儀器：
分析天平、小漏斗、大漏斗、三角瓶(50ml和100ml)、容量瓶(50ml和100ml)、移液管(5ml和10ml)、電爐、分光光度計。
2.試劑：
(1)0.5mol/L碳酸氫鈉浸提液。稱取化學純碳酸氫鈉42.0g溶於800ml水中，以0.5mol/L氫氧化鈉調節pH至8.5，洗入1000ml容量瓶中，定容至刻度，貯存於試劑瓶中。此溶液貯存於塑料瓶中比在玻璃瓶中容易保存，若貯存超過1個月，應檢查pH值是否改變。
(2)無磷活性炭。活性碳常常含有磷，應做空白試驗，檢查有無磷存在。如含磷較多，須先用2mol/L鹽酸浸泡過夜，用蒸餾水沖洗多次後，再用0.5mol/L碳酸氫鈉浸泡過夜，在平瓷漏鬥上抽氣過濾，每次用少量蒸餾水淋洗多次，並檢查到無磷為止。如含磷較少，則直接用碳酸氫鈉處理即可。
(3)磷(P)標准溶液。准確稱取45℃烘乾4—8小時的分析純磷酸二氫鉀0.2197g於小燒杯中，以少量水溶解，將溶液全部洗入1000ml容量瓶中，用水定容至刻度，充分搖勻，此溶液即為含50mg/L的磷基準溶液。吸取50ml此溶液稀釋至500ml，即為5mg/L的磷標准溶液(此溶液不能長期保存)。比色時按標准曲線系列配製。
(4)硫酸鉬銻貯存液。取蒸餾水約400ml，放入1000ml燒杯中，將燒杯浸在冷水中，然後緩緩注入分析純濃硫酸208.3ml,並不斷攪拌，冷卻至室溫。另稱取分析純鉬酸銨20g溶於約60℃的200ml蒸餾水中，冷卻。然後將硫酸溶液徐徐倒入鉬酸銨溶液中，不斷攪拌，再加入100ml0.5%酒石酸銻鉀溶液，用蒸餾水稀釋至1000ml，搖勻貯於試劑瓶中。
(5)二硝基酚。稱取0.25g二硝基酚溶於100ml蒸餾水中。
(6)鉬銻抗混合色劑。在100ml鉬銻貯存液中，加入1.5g左旋(旋光度+21—+22°)抗壞血酸，此試劑有效期24小時，宜用前配製。
1—5.2 土壤中速效磷的測定(碳酸氫鈉法)
了解土壤中速效磷供應狀況，對於施肥有著直接的指導意義。土壤速效磷的測定方法很多，由於提取劑的不同所得的結果也不一致。提取劑的選擇主要根據各種土壤性質而定，一般情況下，石灰性土壤和中性土壤採用碳酸氫鈉來提取，酸性土壤採用酸性氟化銨或氫氧化鈉—草酸鈉法來提取。
方法原理
石灰性土壤由於大量游離碳酸鈣存在，不能用酸溶液來提取速效磷，可用碳酸鹽的鹼溶液。由於碳酸根的同離子效應，碳酸鹽的鹼溶液降低碳酸鈣的溶解度，也就降低了溶液中鈣的濃度，這樣就有利於磷酸鈣鹽的提取。同時由於碳酸鹽的鹼溶液也降低了鋁和鐵離子的活性，有利於磷酸鋁和磷酸鐵的提取。此外，碳酸氫鈉鹼溶液中存在著OH-、HCO-3、CO2-3等陰離子有利於吸附態磷的交換，因此，碳酸氫鈉不僅適用於石灰性土壤，也適用於中性和酸性土壤中速效磷的提取。
待測液用鉬銻抗混合顯色劑在常溫下進行還原，使黃色的銻磷鉬雜多酸還原成為磷鉬藍進行比色。
操作步驟：
1.稱取通過18號篩(孔徑為1mm)的風干土樣5g(精確到0.01g)於200ml三角瓶中，准確加入0.5mol/L碳酸氫鈉溶液100ml,再加一小角勺無磷活性碳，塞緊瓶塞，在振盪機上振盪30分鍾(振盪機速率為每分鍾150—180次)，立即用無磷濾紙干過濾，濾液承接於100ml三角瓶中。最初7～8ml濾液棄去。
2.吸取濾液10ml(含磷量高時吸取2.5—5ml；同時應補加0.5mol/L碳酸氫鈉溶液至10ml)於50ml量瓶中，加硫酸鉬銻抗混合顯色劑5ml充分搖勻，排出二氧化碳後加水定容至刻度，再充分搖勻。
3.30分鍾後，在分光光度計上比色(波長660nm)，比色時須同時做空白測定。
4.磷標准曲線繪制：分別吸取5mg/L磷標准溶液0、1、2、3、4、5ml於50ml容量瓶中，每一容量瓶即為0、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5mg/L磷，再逐個加入0.5mol/L碳酸氫鈉10ml和硫酸一鉬銻抗混合顯色劑5ml，然後同待測液一樣進行比色。繪制標准曲線。
結果計算
土壤速效Pmg/kg=比色液mg/L×定容體積/W×分取倍數
式中：
比色液mg/L—從工作曲線上查得的比色液磷的mg/L數；
W—稱取土樣重量(g)。
分取倍數—100/10
土壤速效磷(P)mg/kg 等級
＜5 低
5—10 中
＞10 高
注意事項
1.活性碳一定要洗至無磷無氯反應。
2.鉬銻抗混合劑的加入量要十分准確，特別是鉬酸量的大小，直接影響著顯色的深淺和穩定性。標准溶液和待測液的比色酸度應保持基本一致，它的加入量應隨比色時定容體積的大小按比例增減。
3.溫度的大小影響著測定結果。提取時要求溫度在25℃左右。室溫太低時，可將容量瓶放入40—50℃的烘箱或熱水中保溫20分鍾，稍冷後方可比色
儀器葯品
1.主要儀器：往復振盪機、電子天平(1/100)、分光光度計、三角瓶(250ml和100ml)、燒杯(100ml)、移液管(10ml、50ml)、容量瓶(50ml)、吸耳球、漏斗(60ml)、濾紙、坐標紙、擦鏡紙、小滴管。
2.試劑配製：見1—5.1。
❹ 如何測定蔬菜樣品中的全磷
答：待測液的制備如下：
（1）同蔬菜樣品全氮的測定中不包括硝態氮的消煮方法（1）或（2）
（2）硫酸—硝酸—高氯酸（三酸）消煮法
① 適用范圍：本消煮液可供包括磷在內的無機成分分析用。消煮時硝酸分解放出新生態氧，具有很強的氧化力，而硫酸的存在可加速氧化過程。高氯酸加熱時生成無水高氯酸，可進一步與有機質作用，分解成水、氯、氧、新生態氯和氧，具有很強的氧化力，使有機復合體很快被氧化分解成簡單的可溶性化合物，二氧化硅則脫水沉澱。
② 試劑配製：
三酸混合液：硫酸（比重1.84）—硝酸（比重1.42）—高氯酸（60%）以1∶8∶1混合。
10%的鹽酸（HCl）溶液V/V∶10毫升濃鹽酸稀釋至100毫升。
0.5%鹽酸溶液：0.5毫升濃鹽酸稀釋至100毫升。
③ 測定步驟：稱取通過0.5毫米孔徑的蔬菜樣品2.0000克，放於100毫升三角瓶中，放入玻璃珠2～3粒以防跳動，瓶口加以彎頸小漏斗，加入10毫升三酸混合液，在通風櫥內放置過夜。然後將三角瓶置於電熱版上低溫消煮40分鍾後，逐漸升高溫度，待消化物殘留較少，消煮液呈白色時，再升高溫度使高氯酸分解，冒白色濃煙，約2～3分鍾即可分解完全，直至硫酸從瓶頸迴流時（出現縷狀白煙）即刻取下三角瓶，以防磷的損失。
用約20毫升10%的鹽酸熱溶液洗滌小漏斗，洗液注入三角瓶中。再加熱溶解殘渣至沸騰，隨即用7～9厘米的無灰快速濾紙過濾濾液於100毫升容量瓶中，用熱的0.5%鹽酸液洗滌濾紙及沉澱，直至近刻度時再加水定容，搖勻備用。此待測液可供磷、鉀、鈉、鈣、鎂、錳、鐵、鋁測定用。濾紙上的殘渣可作二氧化硅（SiO2）定量的測定。
樣品中磷的測定：
（1）釩鉬黃比色法
① 測定原理：適合於含磷量較高的蔬菜樣品的測定（如籽粒樣品）。消煮液中的正磷酸與偏釩酸和鉬酸反應生成黃色的三元雜多酸，其吸光度與磷濃度呈正比，可在波長400～490納米處用分光光度法測定。磷濃度較高時選用較長的波長，較低時選用較短的波長。
此法的優點是操作簡便，可在室溫下顯色，黃色穩定。在硝酸、硫酸、高氯酸等介質中都適用，對酸度和顯色劑的要求也不是太嚴格，干擾物少。在可見光范圍內靈敏度較低，但適測范圍廣（約為1～20毫克/千克P），故廣泛應用於含磷較高而且變幅較大的植物和肥料樣品中的測定。
② 試劑配製：
釩鉬酸銨溶液：鉬酸銨（分析純）25.0克溶於400毫升水中。另將偏釩酸銨（分析純）1.25克溶於300毫升沸水中，冷卻後加入250毫升濃硝酸（分析純）。將鉬酸銨溶液緩緩注入釩酸銨溶液中，不斷攪勻，最後加水稀釋至1升貯於棕色瓶中。
氫氧化鈉（NaOH）溶液（6摩爾/升）：稱取24克氫氧化鈉溶於水中，稀釋至100毫升。
二硝基酚指示劑：稱取0.25克2，6（或2，4）-二硝基酚溶於100毫升水中。
磷標准溶液［ρ（P）=50毫克/升］：稱取在105℃烘乾3小時的磷酸二氫鉀（KH2PO4，分析純）0.2195克溶於少量水，移入1升容量瓶中，加入濃硝酸5毫升後定容。
主要儀器：分光光度計。
③ 測定步驟：准確吸取待測液5～10毫升（V2，0.05～0.75毫克）於50毫升容量瓶中加蒸餾水使體積約為35毫升，加2滴二硝基酚指示劑，用6摩爾/升NaOH或6摩爾/升HNO3中和至溶液剛呈微黃色，准確加入10毫升釩鉬酸銨試劑，用水定容至刻度（V2），搖勻。放置15分鍾後分光光度計比色（採用450納米波長及1厘米光徑比色杯進行測定）。同時做空白試驗進行比色。在標准曲線上查得各自的毫克/升值。
標准曲線或回歸方程：准確吸取50毫克/升P標准液0、1.0、2.0、7.5、10.0、15.0毫升分別放入50毫升容量瓶中，加蒸餾水約至35毫升，按上述步驟顯色，比色測讀吸光度。以系列標准液濃度0、1.0、2.5、5.0、7.5、10、15毫克/升P為橫坐標，吸光度為縱坐標繪制工作曲線，或求回歸方程。
④ 結果計算：
ω（P）＝ρ（P）×（V1/m）×（V 3/V 2）×10－4
式中：ω（P）——植物樣品中磷的質量分數（%）；
ρ（P）——從標准曲線或回歸方程求得的顯色液中磷的質量濃度（毫克/升）；
V1——待測液定容總體積（毫升）；
V2——比色測定時吸取待測液的體積（毫升）；
V3——顯色液定容體積（毫升）；
m——樣品重量（克）；
10－4——將毫克/升濃度單位換算成%。
⑤ 注釋：
［1］顯色液中ρ（P）＝1～5毫克/升時，測定波長用420納米；5～20毫克/升時，測定波長用490納米；待測液中鐵含量高時應選用450納米以清除鐵離子的干擾。標准曲線應用同樣波長測定繪制。也可用空白樣液（即在待測液中不加顯色劑）調整比色計的吸收值為零點的辦法來消除干擾。
［2］一般室溫下，溫度對顯色影響不大，但室溫太低（如＜15℃）時，需顯色30分鍾，穩定時間可達24小時。
［3］如試液為HCl、HClO4介質，顯色劑應用HCl配製；試液為H2SO4介質，顯色劑要用H2SO4配製；顯色液酸的適宜濃度范圍為0.2～1.6摩爾/升。酸度高顯色慢且不完全，甚至不顯色；低於0.2 摩爾/升時易產生沉澱物，干擾測定。鉬酸鹽在顯色液中的終濃度適宜范圍為1.6×10－3～1.0×10－2摩爾/升，釩酸鹽為8.0×10-5～2.2×10－3摩爾/升。
（2）鉬銻抗分光光度法
① 方法原理：適合含磷量較低的植物樣品的測定（如莖稈樣品等）。
蔬菜樣品經酸消煮處理後使各種形態的磷轉化成磷酸鹽，在一定磷濃度范圍內，在酸性介質中待測液中的正磷酸與鉬酸鈉和酒石酸銻鉀生成一種三元雜多酸，後者在室溫下能迅速被抗壞血酸還原為藍色絡合物，可用分光光度計測定。
② 試劑配製：
6摩爾/升NaOH溶液。
0.2%二硝基酚指示劑。
2摩爾/升H2SO4溶液：5.6毫升濃H2SO4加水至100毫升。
鉬銻抗貯存液：濃H2SO4 （分析純）126毫升緩慢地注入約400毫升水中，攪拌冷卻。稱取10.0克鉬酸銨（分析純）溶解於約60℃的300毫升溫水中，冷卻。然後將硫酸溶液緩緩倒入鉬酸銨溶液中，再加入100毫升0.5%酒石酸銻鉀（KSbOC4O6·1/2H2O，分析純）溶液，最後用水稀釋至1升，避光貯存。此貯存液含鉬酸銨為1%，酸濃度為c（1/2 H2SO4）＝4.5摩爾/升。
鉬銻抗顯色劑：1.5克抗壞血酸（C6H8O6，分析純）溶於100毫升鉬銻抗貯存液中。此液需隨配隨用，有效期1天，而冰箱中存放，可用3～4天。
磷標准工作液：［ρ（P）＝5毫克/升］：吸取100毫克/升P標准貯存液稀釋20倍，即為5毫克/升P標准工作溶液，此液不宜久存。
③ 測定步驟：准確吸取待測液2.00～5.00毫升（V2，含P 5～30微克）與50毫升容量瓶中，用水稀釋至約30毫升，加 1～2滴二硝基酚指示劑，滴加6摩爾/升NaOH溶液中和至剛呈黃色，再加入1滴2摩爾/升 H2SO4溶液使溶液的黃色剛剛褪去，然後加入鉬銻抗顯色劑5.00毫升，搖勻定容（V3）。在室溫高於15℃的條件下放置30分鍾後，用1厘米光徑比色杯在波長700納米處測定吸光度，以空白溶液為參比調節儀器零點。
標准曲線或回歸方程：准確吸取ρ（P）＝5毫克/升標准工作溶液0、1、4、6、8毫升，分別放入50毫升容量瓶中，加水至約30毫升，同上步驟顯色並定容，即得0、0.1、0.2、0.4、0.6、0.8毫克/升P標准系列溶液，與待測液同時測定，讀取吸光度。然後繪制標准曲線或直線回歸方程。
④ 結果計算：同（1）計算公式。
根據分光光度計的性能，可選用650～890納米波長處測定，880～890納米處靈敏度高。
❺ 鉬銻鈧比色法
微量磷的測定一般採用磷鉬藍或鉬銻鈧光度法。磷鉬藍是將磷酸與鉬酸銨在酸性條件下生成黃色磷鉬雜多酸，然後用還原劑將黃色的磷鉬雜多酸還原成磷鉬雜多藍，進行測定。常用的還原劑有氯化亞錫、硫酸聯氨、抗壞血酸等。用硫酸聯氨和抗壞血酸作還原劑時，反應速度慢，且需沸水浴加熱，操作較麻煩；用氯化亞錫作還原劑，靈敏度高，顯色快，但藍色的穩定性稍差，對酸度和鉬酸銨濃度的控制要求嚴格；若用抗壞血酸加酒石酸銻鉀作還原劑，也可以使磷鉬雜多酸轉化成穩定的藍色溶液，此法稱為鉬銻鈧法。
鉬銻鈧法操作實例：
森林土壤有效磷的測定
1 0.05mol/L HCl-0.025mol/L 1/2H2So4浸提法
本方法適用於質地較輕的酸性森林土壤中有效磷測定.
1.1 方法要點
以0.05mol/L HCl-0.025mol/L 1/2H2So4溶液浸提酸性森林土壤樣品，使這類土壤中比較具有活性的磷酸鐵、鋁鹽陸續被溶解釋放。
1.2 試劑
① 雙酸浸提劑（0.05mol/L HCl-0.025mol/L 1/2H2So4） ：吸取4.0ml濃鹽酸（分析純）及0.7ml濃硫酸（分析純）於有水的1L容量瓶中，用水稀釋至標度。
② 1%高錳酸鉀溶液： 1g高錳酸鉀（KMnO4，分析純）加100ml水。
③ 0.5％草酸溶液： 0.5g草酸（H2C2O4，分析純）加水100ml。
④ 2,4－二硝基酚（或2,6－二硝基酚）指示劑：溶解0.20g2,4－二硝基酚於100ml 95％乙醇中。
⑤ 2mol/L氫氧化鈉溶液： 80.0g氫氧化鈉溶於水，用水定容到1L。
⑥ 0.5mol/L硫酸溶液：吸取28.0ml濃硫酸，緩緩注入於水中，用水定容至1L。
⑦ 鉬銻貯存液：153ml濃硫酸，緩慢地到入約400ml水中，攪拌，冷卻。另取10g鉬酸銨，溶解於約60℃的300ml水中，冷卻。然後將硫酸溶液緩緩到入鉬酸銨溶液中，再加入100ml10.5％酒石酸銻鉀溶液，最後用水稀釋至1L，避光保存。此貯存液含1％鉬酸銨、2.75mol/L硫酸。
⑧ 鉬銻鈧顯色劑：1.50g抗壞血酸溶於100ml鉬銻貯存液中。此液須隨配隨用。
⑨ 5ppm磷標准溶液： 0.4394g在50℃烘乾的磷酸二氫鉀， 加100ml水，加5ml濃硫酸（防腐），用水定容到1L，濃度為100ppm磷，此溶液可以長期保存。吸取上述溶液10ml於200ml容量瓶中，加水至標度，濃度為5ppm磷標准溶液，此溶液不宜久存。
1.3 主要儀器
分光光度計； 往復振盪機 （速率每分鍾150-180次） ； 容量瓶（50ml）。
1.4 測定步驟
1.4.1 待測液的制備：稱取5.0g（精確到0.01g）通過2mm篩孔的風干土樣於浸提瓶中。加25ml雙酸浸提液劑，振盪5min，過濾，待測液供測有效磷用。同時做試劑空白試驗。
1.4.2 測定：吸取待測液2-10ml於50ml容量瓶中，加1滴2,4-二硝基酚指示劑，用2mol/L氫氧化鈉溶液調到黃色，然後用0.5mol/L硫酸溶液調ph到溶液剛呈微黃色。用吸管加5ml鉬銻抗顯色劑，用水定容到標度，搖勻。30min後，在分光光度計上用2cm光徑比色皿（如含磷量較高，應用1cm的比色皿）、700nm波長比色，以空白試驗溶液為參比液，調吸收值到零，然後測定待測顯色液的吸收值。在工作曲線上查出顯色液的磷ppm數，顏色在8h內可保持穩定。
如待測液中的棕色有機質影響比色時需脫色，步驟如下：於已有待測液的容量瓶中加1-4ml 1mol/L硫酸，加入水到15-20ml，加2滴1%高錳酸鉀， 把容量瓶在電爐上加熱至沸，立即取下，加1滴0.5%草酸，搖勻，等溶液顏色穩定後，若還有色，再加1滴0.5％草酸，再加熱，一般加1-3滴0.5％草酸即可無色，切不可多加。
1.4.3 工作曲線的繪制：分別吸取5ppm磷的標准溶液0、1、2、3、4、5、6ml於50ml容量瓶中，與測定時同樣進行顯色，得0、0.1、0.2、0.3、 0.4、0.5、0.6ppm磷標准系列顯色液。用0ppm磷標准系列顯色液作參比，調吸收值到零，由稀到濃測標准系列顯色液的吸收值。在方格紙上以吸收值作縱坐標，磷ppm數為橫坐標繪制工作曲線。
1.5 結果計算
c×V×ts
有效磷（ P，ppm）＝ ———— (1)
m 1 ×k 2
有效磷（ P，mg/kg）=有效磷（P，ppm） (2)
式中：c---從工作曲線上查得顯色液的磷ppm數；
V---顯色液體積，50ml；
浸提液總體積(ml)
ts---分取倍數，ts＝—————————；
吸取浸出液體積(ml)
K 2 ---由風干土樣換算成烘乾土樣的水分換算系數；
m 1 ---風干土樣質量，g。
❻ 有效磷的測定中為什麼用10ml鉬銻抗
國家農業標准中，採用碳酸氫鈉浸提－鉬銻抗比色法（Olsen 法）測定石灰性土壤中（中性及酸性土可參照使用）的有效磷含量（其中操作規程以下簡稱規程），其中校準曲線或回歸方程較易做出或求出，因此也較容易測定。但是，要提高其測定準確性，減輕勞動量還需要注意以下幾點。
（1）所用的試劑要按規程要求准確配製。一是選用質量合格的儀器、葯品、試劑、純水，要求測定者首先對要使用的儀器進行校準，在試劑的配製中注意觀察葯品、試劑、純水的顏色，發現異常要查找原因；二是精確稱取或量取；三是按規程要求的步驟順序配製，調節酸鹼度。但需要說明的是：①該規程要求的鉬銻抗顯色劑，稱取的抗壞血酸（C6H8O6左旋，旋光度+21°－22°）0.5g 溶於100mL 鉬銻貯備液中測定的結果，土壤有效磷含量要低於稱取1.5g 抗壞血酸溶於100mL 鉬銻貯備液中測定的結果。②配製磷標准貯備液的KH2PO4要選用優級純的，而且要經過105℃烘乾2h，並冷卻後再稱取配製。
（2）所需試劑要按規程要求保存與使用。鉬銻貯備液要盛放於棕色瓶中，避光存放；鉬銻抗顯色劑要現用現配。
（3）所用的器械要反復沖洗干凈，有的還要乾燥。測定中所用的（刻度、胖肚）吸管、塑料瓶、瓶蓋、漏斗、三角瓶、容量瓶、瓶塞、比色皿要反復沖洗干凈，塑料瓶、瓶蓋、漏斗、三
角瓶需烘乾後再用。
（4）要嚴格土液比、溫度、振盪頻率及振盪時間。由於這4 個方面對浸提出的磷含量有至關重要影響，因此一定要嚴格控制。①要嚴格土液比。即風干土樣准確稱取2.50g（電子天平先預熱30min，再校準後使用），加入的碳酸氫鈉浸提劑准確量取50.00mL。②要嚴格浸提溫度。可把浸提劑先放在恆溫（25±1）℃的環境中，調溫至（25±1）℃，再加入到稱取的測土樣塑料瓶中；振盪要使用恆溫水浴振盪機，先使水溫調至（25±1）℃，並保持該水溫振盪。③嚴格振盪頻率及時間。使用恆溫水浴振盪機振盪，振盪頻率應調為（180±20）rpm，振盪時間為（30±1）min 後，立即過濾。
（5）盛有風干土樣的塑料瓶，在加入浸提劑後，要蓋緊瓶蓋，搖勻後再振盪。
（6）過濾要使用無磷定量濾紙，若發現濾液混濁，要重新過濾。
（7）在吸取（量取）、稱取所需試劑、溶液、葯品時，不僅質量（體積）要准，而且不能污染和相互污染。
（8）在吸取5.00mL 鉬銻抗顯色劑加入盛有系列溶液或浸提液的容量瓶中時，要緩慢加入，並慢慢搖動，排出CO2氣體，再用純水定容搖勻。要避免試液溢出。
（9）定容搖勻後的待測系列溶液或試樣溶液，顯色溫度要保持在20℃以上，若室內溫度過低，可放置於30～40℃的恆溫箱中保溫30min（溫度要一致），使其充分顯色，取出冷卻後再比色測定。
（10）測定吸光度的1cm 光徑比色皿，可用稀鹽酸浸泡一夜，再依次用自來水、純水沖洗干凈，泡於純水中待用，若長期不用應放置於乾燥盒內。
（11）測定吸光度的比色皿，在出廠時應經過配對。未配對的，測定人員可將其刷洗干凈後，自行配對，從中選用經調零後吸光度相差±0.001A 的比色皿，最好選擇吸光度一致的比色皿。使用時要使光滑面對准光路，操作人員操作時要手持毛面，擦拭乾凈外面的液體後，再放入比色槽內。
（12）測定前應確保紫外－可見分光光度計能夠正常使用。①要配備合適的穩壓器，並接地線，使電壓穩定，周圍無擾動干擾。②光路要對正。可先在比色槽內不放比色皿，檢查其吸光度是否一致，不一致的要進行調整。③要先遇熱30min，再測定吸光度。
（13）測定時刷洗干凈的比色皿，要先用待測試液沖刷幾遍，再倒入待測試液測定吸光度（若此時仍有小的CO2氣泡，要用手指輕彈出後再測定）；測定後倒出試液，用純水沖刷幾遍，再倒入下一個待測試液（要先用該試液沖刷後）進行測定。
（14）據資料介紹，可採用紫外－可見分光光度計，在波長880nm 處比色，測定吸光度，而不必使用活性炭進行脫色，以減少勞動量。但在實際測定中，若不加入1g 無磷活性炭，在波長700nm 處比色，測定結果偏低。
（15）如果土壤有效磷含量較高，可吸取5.00mL 浸提溶液，另外再吸取5.00mL 碳酸氫鈉浸提劑，以保持顯色時溶液的酸度。計算結果按所取浸提液的分取倍數計算。
（16）每批樣品進行測定，要做空白試驗、平行試驗，並帶一個參比樣（參比樣可自製）。以檢測測定結果的准確性，不準確的要查找原因，重做。
（17）要做好土樣稱取、過濾、吸取轉移、測定結果的紀錄，並且每一項操作都要認真核對，避免人為出錯。
❼ 為什麼用鉬銻抗法測定活性污泥中的林
為什麼用鉬銻抗法測定活性污泥中
微量磷的測定一般採用磷鉬藍或鉬銻鈧光度法.磷鉬藍是將磷酸與鉬酸銨在酸性條件下生成黃色磷鉬雜多酸,然後用還原劑將黃色的磷鉬雜多酸還原成磷鉬雜多藍,進行測定.常用的還原劑有氯化亞錫、硫酸聯氨、抗壞血酸等.用硫酸聯氨和抗壞血酸作還原劑時,反應速度慢,且需沸水浴加熱,操作較麻煩；用氯化亞錫作還原劑,靈敏度高,顯色快,但藍色的穩定性稍差,對酸度和鉬酸銨濃度的控制要求嚴格；若用抗壞血酸加酒石酸銻鉀作還原劑,也可以使磷鉬雜多酸轉化成穩定的藍色溶液,此法稱為鉬銻鈧法.
鉬銻鈧法操作實例：
森林土壤有效磷的測定
1 0.05mol/L HCl-0.025mol/L 1/2H2So4浸提法
本方法適用於質地較輕的酸性森林土壤中有效磷測定.
1.1 方法要點
以0.05mol/L HCl-0.025mol/L 1/2H2So4溶液浸提酸性森林土壤樣品,使這類土壤中比較具有活性的磷酸鐵、鋁鹽陸續被溶解釋放.
1.2 試劑
① 雙酸浸提劑（0.05mol/L HCl-0.025mol/L 1/2H2So4） ：吸取4.0ml濃鹽酸（分析純）及0.7ml濃硫酸（分析純）於有水的1L容量瓶中,用水稀釋至標度.
② 1%高錳酸鉀溶液：1g高錳酸鉀（KMnO4,分析純）加100ml水.
③ 0.5％草酸溶液：0.5g草酸（H2C2O4,分析純）加水100ml.
④ 2,4－二硝基酚（或2,6－二硝基酚）指示劑：溶解0.20g2,4－二硝基酚於100ml 95％乙醇中.
⑤ 2mol/L氫氧化鈉溶液：80.0g氫氧化鈉溶於水,用水定容到1L.
⑥ 0.5mol/L硫酸溶液：吸取28.0ml濃硫酸,緩緩注入於水中,用水定容至1L.
⑦ 鉬銻貯存液：153ml濃硫酸,緩慢地到入約400ml水中,攪拌,冷卻.另取10g鉬酸銨,溶解於約60℃的300ml水中,冷卻.然後將硫酸溶液緩緩到入鉬酸銨溶液中,再加入100ml10.5％酒石酸銻鉀溶液,最後用水稀釋至1L,避光保存.此貯存液含1％鉬酸銨、2.75mol/L硫酸.
⑧ 鉬銻鈧顯色劑：1.50g抗壞血酸溶於100ml鉬銻貯存液中.此液須隨配隨用.
⑨ 5ppm磷標准溶液：0.4394g在50℃烘乾的磷酸二氫鉀,加100ml水,加5ml濃硫酸（防腐）,用水定容到1L,濃度為100ppm磷,此溶液可以長期保存.吸取上述溶液10ml於200ml容量瓶中,加水至標度,濃度為5ppm磷標准溶液,此溶液不宜久存.
❽ 測土壤磷中，配製的鉬銻儲存液(放在棕色瓶)，可以存放多久
鉬銻儲存液，在棕色試劑瓶中，密封，且在4℃下，可以存放2個月以上。至於是2個月零幾天，這個不敢說，為保險起見，超過兩個月就別用了，重新配吧，樣品制備那麼難，因為試劑而浪費，太虧了。抗壞血酸，要現配現用，一定記住。
❾ 如何配製5+1硫酸-高氯酸
方法原理在高溫條件下，土壤中含磷礦物及有機磷化合物與高沸點的硫酸和強氧化劑高氯酸作用，使之完全分解，全部轉化為正磷酸鹽而進入溶液，然後用鉬銻抗比色法測定。操作步驟1.在分析天平上准確稱取通過100目篩(孔徑為0.25mm)的土壤樣品1g(精確到0.0001)置於50ml三角瓶中，以少量水濕潤，並加入濃H2SO48ml，搖動後(最好放置過夜)再加入70—72%的高氯酸(HClO4)10滴搖勻。2.於瓶口上放一小漏斗，置於電爐上加熱消煮至瓶內溶液開始轉白後，繼續消煮20分鍾，全部消煮時間約為45—60分鍾。3.將冷卻後的消煮液用水小心地洗入100ml容量瓶中，沖冼時用水應少量多次。輕輕搖動容量瓶，待完全冷卻後，用水定容，用乾燥漏斗和無磷濾紙將溶液濾入乾燥的100ml三角瓶中。同時做空白試驗。4.吸取濾液2—10ml於50ml容量瓶中，用水稀釋至30ml，加二硝基酚指示劑2滴，用稀氫氧化鈉(NaOH)溶液和稀硫酸(H2SO4)溶液調節pH至溶液剛呈微黃色。5.加入鉬銻抗顯色劑5ml，搖勻，用水定容至刻度。6.在室溫高於15℃的條件下放置30分鍾後，在分光光度計上以700nm的波長比色，以空白試驗溶液為參比液調零點，讀取吸收值，在工作曲線上查出顯色液的P—mg/L數。7.工作曲線的繪制。分別吸取5mg/L標准溶液0，1，2，3，4，5，6ml於50ml容量瓶中，加水稀釋至約30ml，加入鉬銻抗顯色劑5ml,搖勻定容。即得0，0.1,0.2,0.3,0.4,0.5,0.6,mg/LP標准系列溶液，與待測溶液同時比色，讀取吸收值。在方格坐標紙上以吸收值為縱坐標，Pmg/L數為橫坐標，繪製成工作曲線。結果計算全P %=顯色液mg/L×顯色液體積×分取倍數／(W×106)×100式中：顯色液Pmg/L—從工作曲線上查得的Pmg/L；顯色液體積—本操作中為50ml；分取倍數—消煮溶液定容體積/吸取消煮溶液體積；106—將ug換算成gW—土樣重(g)。兩次平行測定結果允許誤差為0.005%。儀器、試劑1.主要儀器：分析天平、小漏斗、大漏斗、三角瓶(50ml和100ml)、容量瓶(50ml和100ml)、移液管(5ml和10ml)、電爐、分光光度計。2.試劑：(1)0.5mol/L碳酸氫鈉浸提液。稱取化學純碳酸氫鈉42.0g溶於800ml水中，以0.5mol/L氫氧化鈉調節pH至8.5，洗入1000ml容量瓶中，定容至刻度，貯存於試劑瓶中。此溶液貯存於塑料瓶中比在玻璃瓶中容易保存，若貯存超過1個月，應檢查pH值是否改變。(2)無磷活性炭。活性碳常常含有磷，應做空白試驗，檢查有無磷存在。如含磷較多，須先用2mol/L鹽酸浸泡過夜，用蒸餾水沖洗多次後，再用0.5mol/L碳酸氫鈉浸泡過夜，在平瓷漏鬥上抽氣過濾，每次用少量蒸餾水淋洗多次，並檢查到無磷為止。如含磷較少，則直接用碳酸氫鈉處理即可。(3)磷(P)標准溶液。准確稱取45℃烘乾4—8小時的分析純磷酸二氫鉀0.2197g於小燒杯中，以少量水溶解，將溶液全部洗入1000ml容量瓶中，用水定容至刻度，充分搖勻，此溶液即為含50mg/L的磷基準溶液。吸取50ml此溶液稀釋至500ml，即為5mg/L的磷標准溶液(此溶液不能長期保存)。比色時按標准曲線系列配製。(4)硫酸鉬銻貯存液。取蒸餾水約400ml，放入1000ml燒杯中，將燒杯浸在冷水中，然後緩緩注入分析純濃硫酸208.3ml,並不斷攪拌，冷卻至室溫。另稱取分析純鉬酸銨20g溶於約60℃的200ml蒸餾水中，冷卻。然後將硫酸溶液徐徐倒入鉬酸銨溶液中，不斷攪拌，再加入100ml0.5%酒石酸銻鉀溶液，用蒸餾水稀釋至1000ml，搖勻貯於試劑瓶中。(5)二硝基酚。稱取0.25g二硝基酚溶於100ml蒸餾水中。(6)鉬銻抗混合色劑。在100ml鉬銻貯存液中，加入1.5g左旋(旋光度+21—+22°)抗壞血酸，此試劑有效期24小時，宜用前配製。