韓春雨發明基本編輯技術

A. 撤稿後的河北科技大學韓春雨實驗室搬到哪裡了

主動申請撤稿的消息公開後，河北科技大學副教授韓春雨及其團隊的基因編輯技術NgAgo再次成為學術界的焦點。

韓春雨的實驗室搬了，不再是在掛有「河北省葯用分子化學實驗室」牌子的大樓，而是與之相隔200米左右的一棟五層舊樓。這棟樓曾因為韓春雨將實驗室的搬遷，在一樓大門的腰封貼上「河北科技大學基因編輯技術研究中心」字樣。但如今，腰封上的文字已經不見了。

要想進入韓春雨團隊所在的19個房間，並不容易。不管是爬樓梯還是坐電梯，都得通過需要門禁卡的大門。不僅如此，不少監控攝像頭安裝在四層的樓道，這並不是所有樓層都能享受的待遇。

不僅如此，去年11月獲得的房間分布圖顯示，韓春雨團隊所在的19個房間中，除了實驗室、辦公室、文印室之外，還有一間專門的「監控室」。

8月3日，《自然-生物技術》發表聲明稱，經韓春雨團隊主動申請，期刊決定將韓春雨團隊關於基因編輯技術NgAgo的論文撤回。

這篇論文令韓春雨諸多頭銜和榮譽加身，他成為了河北省科協副主席、「美麗河北 最美教師」。更重要的是，不可否認，這篇已經撤回的論文曾直接促成了一個2.24億元的項目得到批復，以及一筆為期兩年、共100萬的國家自然科學基金委項目獲批。

B. 韓春雨團隊在《nature biotech》上發表的 ngago 基因編輯技術是什麼有何突破

NgAgo-gDNA技術是以DNA作為引導工具的基因編輯技術。NgAgo-gDNA技術的工作原理與CRISPR-Cas9技術有些類似，都是在引導工具的引導下，令核酸酶對特定位點的基因序列進行切割，從而進行基因編輯。不同的是NgAgo-gDNA技術中所用到的引導工具是一段引導DNA（gDNA）而不是CRISPR-Cas9技術中的RNA。由於也不需要通過蛋白（如鋅指蛋白）來尋找需要替換的序列，因此，NgAgo-gDNA技術與CRISPR-Cas9技術一樣，較之前的基因編輯技術，在操作上要簡單方便得多，利於其在應用中的推廣。
NgAgo-gDNA技術所用的核酸酶是NgAgo，一種存在於格氏嗜鹽鹼桿菌(Natronobacteriumgregoryi)中的Ago內切核酸酶蛋白。Ago核酸酶最初是由荷蘭科學家發現其可以有效地利用單鏈DNA作為短介質，去相對精準地切割基因組靶點。而最初的研究的局限性在於實驗所需要的溫度在65-75攝氏度，不能在生理條件下完成。而通過韓春雨教授團隊的不斷搜尋，最終他們發現來自於格氏嗜鹽鹼桿菌的Ago同源蛋白可以在生理條件下實現類似的功能。
NgAgo-gDNA技術可能比CRISPR-Cas9技術擁有更多優勢，與CRISPR-Cas9技術相比，NgAgo-gDNA技術可編輯的靶位點的選擇范圍更大。因為Cas9需要與基因組上19個鹼基配對，並要求在這組鹼基後緊鄰一個特定的三鹼基序列（PAM序列），一定程度上限制了靶位點的選擇范圍，而NgAgo-gDNA技術中靶位點的選擇則不受PAM序列的限制，編輯對象所受限制更小，幾乎能編輯基因組內任何位置。
另外，與NgAgo結合的gDNA長度為24個鹼基，這比與Cas9結合的19個鹼基的gRNA要長5個鹼基，理論上其精確性要提高1024（4的5次方）倍。並且韓春雨團隊的研究還發現，與CRISPR-Cas9相比，NgAgo–gDNA系統對向導序列-靶序列錯配容忍度很低。編輯精準度更高，能更有效地避免脫靶現象。

C. 韓春雨是誰韓春雨事件是怎麼回事

韓春雨，男，1974年1月11日出生於河北石家莊，中國協和醫科大學理學博士。

現任河北科技大學生物科學與工程學院生命科學系副教授，碩士研究生導師。

韓春雨事件是韓春雨在頂級學術雜志發表了論文，後面實驗結果因為無法重復被質疑，韓春雨主動撤回論文，接受調查的一些列事件：

2016年5月2日，韓春雨作為通訊作者在國際頂級期刊《自然·生物技術》（Nature Biotechnology）雜志上發表了一篇研究成果，即發明了一種新的基因編輯技術——NgAgo-gDNA，向已有的最時興技術CRISPR-Cas9發起了挑戰。

論文發表後，在國內外引發強烈關注，甚至被部分媒體譽為「諾獎級」實驗成果。但此後不久，該論文內容就陷入爭論：有人提出韓春雨的試驗無法重復，有人說可以重復，彼此爭論不休、難有定論。

2017年1月19日，《自然-生物技術》發布最新聲明指出，該期刊已獲得有關韓春雨實驗可重復性的新數據，需要調查研究這些數據。

2017年8月3日，《自然-生物技術》發布聲明稱，韓春雨團隊主動申請撤回其於2016年5月2日發表在該期刊的論文。

2018年8月31日晚，河北科技大學公布韓春雨團隊撤稿論文的調查處理結果稱，未發現韓春雨團隊有主觀造假情況。

(3)韓春雨發明基本編輯技術擴展閱讀：

根據論文，實驗由不同實驗室研究人員獨立操作，但實驗結果均未證明NgAgo具有任何基因組編輯活性。黃志偉告訴記者，他的實驗室也重復很多次，但一直沒發現「切割」效果，沒得到預想結果。

此外，論文還對韓春雨此前聲明的論文結果重現需要「卓越的實驗技能」，以及重復實驗未果，可能因為NgAgo的活性對培養物中的支原體或細菌非常敏感等言論提出質疑。

論文寫道，不論是最初發布的步驟，還是後來在全球科學家質粒共享非盈利組織Addgene網站上更新的信息，似乎都不涉及任何似乎需要「卓越的實驗技能」的步驟。

同時提出，不可能所有的獨立實驗室的細胞都被污染，導致一致陰性結果。

這篇論文結尾處，學者提到，希望韓春雨能夠澄清NgAgo的不確定性，並能夠提供重復實驗結果所需要的細節。

D. 河北科技大學副教授韓春雨發明的基因編輯能治好艾滋病嗎

韓教授在這方面做出了巨大的貢獻。佳學基因正在致力於將該技術轉化為可以實用的產品。

E. 關於韓春雨發明基因修飾作文

韓春雨是中國醫學科學院醫學科學家韓春雨，1974年生，河北石家莊人。1992年本科畢業於河北師范大學，2000年在中國農業科學院獲得碩士學位，2003年在中國協和醫科大學/中國醫學科學院獲得博士學位。

F. 韓春雨基因專利為什麼撤回

因為韓春雨和沈嘯（申請專利的發明人）未在規定期限內答復國家知識產權的第一次審查意見通知書，該專利的申請被視為撤回。
其實韓春雨這個實驗結果一直飽受爭議，一些知名實驗室進行完全重復實驗，卻仍然得不出韓春雨實驗的結果。

G. 如何看待河北科技大學韓春雨的基因編輯成果被方舟子質疑的事件

人為什麼會質疑，其實學問越高知識越高的人越會對事物產生質疑，因為專人類被當前科學了屬解的范圍所限制，其實人類的知識也是限制科學發展的一個主要因素，愛因斯坦曾經說過想像力比任何都重要，想像力可以把不可能變成可能，科學發展的道路上都會受到各種質疑，這是科學發展中的一個必要過程，我認為質疑可以但是不能提出否定態度，科學道路上沒有不可能，也沒有唯一，古人還認為地球是方的呢，誰要說圓的那在當時絕對是神經病，方舟子總是對他人給與否認態度這點就是他不對了，站的高度不夠吧只能這么說。

H. 韓春雨基因編輯技術真的厲害嗎

一項DNA編輯技術是否有優勢涉及到方方面面。從目前的情況來看，NgAgo的優勢很明顯，主要體現在
1）反應效率不低（不說高，但不低）
2）特異性較好（但有人引用說因為gDNA比Cas9的gRNA 長5nt，所以精確度提高1024倍，這個「理論上」的4^5不得不說是噱頭，因為脫靶率（精度）不是這個意思，這樣外行的計算是不該的）
3）不依賴PAM
4）NgAgo本身分子量不大

另外還有一些文章中作為優勢，但也可能是劣勢的性質（比如使用ssDNA介導，提高特異性同時會帶來很多問題）不論如何優勢是明顯的，但是僅僅這些方面並不夠，還需要研究更多問題，比如特異性好是有限實驗基礎上的理論結論，實際應用脫靶率如何要看具體情況。

目前來看有幾項事關這項技術未來的、優先待驗證的問題是：
1）系統正交性
2）多位點編輯能力
3）NgAgo蛋白的模塊化程度（工程化改造的潛力）
4）ssDNA的通用性和缺點

不要小看上述問題，條條都是卡脖子的，一條不給力就會被CRISPR比下去。很多人知道CRISPR很火，也知道CRISPR是很好的基因組編輯工具，容易以為基因編輯工具本身是很牛的，實際上CRISPR之所以火，還有很大一部分原因在於高正交性、高通用性、高工程化潛力帶來的廣泛應用，諸如轉錄後調控、人工TF等等。核酸定點內切是一個基礎性質，帶來了上述性質的可能性，需要經過驗證才能就是否可以作為CRISPR的替代技術有一個結論。

比如在不同物種細胞系統中的正交性如何？目前知道Ago在真核到原核細胞中廣泛存在同源基因，這個在文章中是作為某種優勢來講的，但實際上可能是一個劣勢。因為正交性問題，在人類細胞中好用未必在其它物種平台中好用。大家可能注意到了，文章開篇第二個實驗就是做了一個簡單的正交性測試，測試結果還不錯，文中提到
which implies that there is very limited 5 ′ phosphorylated ssDNA present in human cells, suggesting that endogenous ssDNAs will not mislead NgAgo to off-target sites
這當然不足以說明NgAgo具有高正交性，作者也用了implies的措辭，還有待進一步證實。可以從文中看出，作者最擔心的問題其實也是系統正交性，在文章最後，作者特意強調需要進一步的高通量實驗來研究這個問題，可見作者並非沒有意識到，而是受限於時間或其它科研條件。

除此之外，多位點編輯能力是CRISPR的一項重大優勢。我們現在知道NgAgo和ssDNA的結合是非常穩定的（在37℃條件下不可逆），這當然是某種提高特異性的優勢，但穩定也是雙刃劍，有可能成為劣勢。文中提到：
similar to mammalian Ago2, which cannot exchange its bound oligos with free oligos at 37 °C
這樣的性質是否會影響到NgAgo在多位點編輯中的反應效率不得而知。我看到大部分評論都沒有提到這個問題。

CRISPR還有一個亮點是Cas9的模塊化性質。可以容許進行較多的蛋白工程改造，NgAgo是否有這樣的高度模塊化的性質也將直接決定這項技術能否問鼎優秀DNA編輯技術的地位。如果對蛋白質工程設計的可擴展性不好，那麼其應用很有可能受限。

最後還有ssDNA在各種細胞平台中如何使用等問題，我們現在知道CRISPR系統常導入gRNA或通過sgRNA transcription vector來製造介導核酸，DNA顯然不能用這招，直接導入DNA本身就限制了NgAgo在一大類物種當中的應用潛力。有同學展望天然的5'p-ssDNA的加工機制未來可以利用，然而文章中提到人類細胞中5'p-ssDNA並不豐富。這有利於系統正交性，卻也暗示ssDNA的使用有可能成為這項技術的一個瓶頸。有一位答主說ssDNA的用量只要CRISPR技術中RNA用量的1/10，這顯然是英文不好造成了誤讀，文章中原文是：
if the sgRNA is expressed from a plasmid and the normal dosage of an ssDNA guide is only ~1/10 of that of a sgRNA expression plasmid
可見，特異性ssDNA在這項實驗中是可以通過使用濃度飽和來增強NgAgo的特異性的（與破壞正交性的ssDNA競爭性結合NgAgo），但是這個robustness是一柄雙刃劍。DNA分子本身的穩定性、系統的魯棒性和使用方式會影響這個系統的可控性。一旦系統可控性不好，基本上會被最重要的生物醫療領域排除在外。