『壹』 流式抗体如何选择
第一看清楚抗的是你的目标蛋白质没错，目标蛋白的物种不要搞错了，有些抗体对好几个物种的目标蛋白有反应，对你的实验有没有影响。
第二抗体的物种是小鼠,大鼠,兔子还是什么。虽然现在荧光都标记好了，一般不需要二抗。但最好还是选择你有匹配二抗的一抗，以备不时之需。如果抗体还能够做荧光染色啊，western blot啊用途多了更好。
第三荧光的颜色选择一是你的流式仪一定要能读，二是跟你需要counterstain的其他流式抗体错开频率。
第四抗体的球蛋白亚型。因为要根据这个选择isotype对照用抗体。其实严格来说不光亚型一样，浓度也要一样，每个抗体分子携带的荧光分子数量也要一样才行。最好是一个isotype你的好几个抗体都能用，就省了事了。
第五到底能测试多少样品。有些产品介绍没说清楚，可以根据推荐的浓度计算一下。一是这样才看出价格高低，二是根据自己需要选择大支还是小支.买多了过期也是浪费。
当然也可以看看他们的克隆编号--有些文献会讨论某目标蛋白的各种抗体的特异性哪个好哪个坏，这都是使用者的经验。但一般买抗体没有人这么小心这么麻烦啦。
你还可以看制作抗体所用的抗原是什么，有的是肿瘤组织提取液，有的是重组蛋白，有的是肽链片断。选用哪个跟你的实验用途有关。有些蛋白质有很多亚型，也要注意是否测试过跟那些亚型起反应。
一个非常重要的忘记说，就是单抗还是多抗。也要根据实验性质选择。搜到一篇不错的文章谈这个问题你看下吧。
『贰』 调查：大家用的一般是什么牌子的流式抗体
eBioscience的抗体挺好用的，就是到货时间比较慢。BD是老品牌，也是不错的，但比前者贵了一丢丢~~~
『叁』 怎么选择各公司的流式抗体
一、如何搭配流式抗体荧光标记
流式抗体荧光标记搭配主要由3个因素决定的：流式细胞仪能检测多少个通道、需要同时检测检测多少个指标、厂家的抗体有多少种荧光标记。如果流式细胞仪的通道越多，那么同一份样本能同时做的表面/胞内标志就越多
A、如何根据流式细胞仪搭配流式抗体
1）BD流式细胞仪（06版目录第614页）
流式细胞仪能检测多少个通道是由有多少根激光决定的以及每根激光的功能决定的，所以首先需要注意两点：
流式细胞仪有哪些激光。比如标配的FACSCalibur只有一根488nm的激光，能做FL1、FL2、FL3三个荧光通道/三个颜色，而选配的Calibur(FACSCalibur的简称)配有488nm和635nm两根激光，可以检测FL1-FL4四个通道/4个颜色。
不同型号的流式细胞仪的同样的一个通道检测荧光素的能力是不一样的，比如Calibur的FL3（第3通道）能检测PE-TexasRed,PE-Cy5,PerCP,PerCPCy5.5,PE-Cy7,而Aria的第3通道只能检测PE-TexasRed,PE-Cy5,PerCP。Calibur第3通道能检测的PerCP-Cy5.5在FACSAria上是第4通道检测。Calibur和LSR都能检测4个颜色，但是第4个通道检测荧光素是不一样的
搭配荧光素原则
搭配流式荧光素有2个原则：每个通道只能选择1种荧光素；各个通道之间的荧光素可以随意搭配，但需注意
1、每个通道只能选择1种荧光素。以Calibur为例说明，Calibur的FL1通道选择了FITC就不能选择AlexaFluro488，或者选择了AlexaFluro488就不能选FITCCalibur的FL3通道尽管能检测PE-TexasRed,PE-Cy5,PerCP,PerCP-Cy5.5,PE-Cy7五个荧光素，但是我们我们搭配的时候只能选择其中1个。
2、各个通道之间的荧光素可以随意搭配：如果客户的流式细胞仪能做4个通道，在第1个原则之下，那么每个通道随便选出1个荧光素就可以组合成4个颜色。以2跟激光的Calibur为例，Calibur各个荧光素之间可以搭配出16种组合。
比如常用的搭配是FITC(FL1)＋PE（FL2）＋PerCP（FL3）+APC(FL4),这个搭配组合可以更改成AlexFluro(FL1)＋PE（FL2）＋PerCP（FL3）+APC(FL4),或者FITC(FL1)＋PE（FL2）＋PerCP（FL3）+AlexFluro(FL4)，或者FITC(FL1)＋PE（FL2）＋PE-Cy5（FL3）+APC(FL4)等等。总之，在第1原则之下，我们可以随意搭配和组合各个荧光素。但是需要注意的是，APC和PE-Cy5一起使用。
『肆』 如何选择适合的流式抗体（五）：举例
举例一：BD流式仪器FACSCalibur试剂选择及常见问题解答
一、如何搭配流式抗体荧光标记
流式抗体荧光标记搭配主要由3个因素决定的：流式细胞仪能检测多少个通道、需要同时检测检测多少个指标、厂家的抗体有多少种荧光标记。如果流式细胞仪的通道越多，那么同一份样本能同时做的表面/胞内标志就越多
A、如何根据流式细胞仪搭配流式抗体
1）BD流式细胞仪（06版目录第614页）
流式细胞仪能检测多少个通道是由有多少根激光决定的以及每根激光的功能决定的，所以首先需要注意两点：
流式细胞仪有哪些激光。比如标配的FACSCalibur只有一根488nm的激光，能做FL1、FL2、FL3三个荧光通道/三个颜色，而选配的Calibur(FACSCalibur的简称)配有488nm和635nm两根激光，可以检测FL1-FL4四个通道/4个颜色。
不同型号的流式细胞仪的同样的一个通道检测荧光素的能力是不一样的，比如Calibur的FL3（第3通道）能检测PE-TexasRed,PE-Cy5,PerCP,PerCPCy5.5,PE-Cy7,而Aria的第3通道只能检测PE-TexasRed,PE-Cy5,PerCP。Calibur第3通道能检测的PerCP-Cy5.5在FACSAria上是第4通道检测。Calibur和LSR都能检测4个颜色，但是第4个通道检测荧光素是不一样的
搭配荧光素原则
搭配流式荧光素有2个原则：每个通道只能选择1种荧光素；各个通道之间的荧光素可以随意搭配，但需注意
1、每个通道只能选择1种荧光素。以Calibur为例说明，Calibur的FL1通道选择了FITC就不能选择AlexaFluro488，或者选择了AlexaFluro488就不能选FITCCalibur的FL3通道尽管能检测PE-TexasRed,PE-Cy5,PerCP,PerCP-Cy5.5,PE-Cy7五个荧光素，但是我们我们搭配的时候只能选择其中1个。
2、各个通道之间的荧光素可以随意搭配：如果客户的流式细胞仪能做4个通道，在第1个原则之下，那么每个通道随便选出1个荧光素就可以组合成4个颜色。以2跟激光的Calibur为例，Calibur各个荧光素之间可以搭配出16种组合。
比如常用的搭配是FITC(FL1)＋PE（FL2）＋PerCP（FL3）+APC(FL4),这个搭配组合可以更改成AlexFluro(FL1)＋PE（FL2）＋PerCP（FL3）+APC(FL4),或者FITC(FL1)＋PE（FL2）＋PerCP（FL3）+AlexFluro(FL4)，或者FITC(FL1)＋PE（FL2）＋PE-Cy5（FL3）+APC(FL4)等等。总之，在第1原则之下，我们可以随意搭配和组合各个荧光素。但是需要注意的是，APC和PE-Cy5一起使用的话，上流式以后，容易导致补偿过度
B、BD公司抗体有多少种荧光素
1）供应商能提供的每种抗体的荧光素是不一样的我们需要根据同时结合供应商能提供的每种抗体的荧光素进行搭配。原则上同一个标志的不同的克隆号带同1个荧光素在应用上没有区别的，但是有些不同克隆号的抗体之间可能会有一些稍微的差异，需要仔细看说明书。我们可以尽量选择在说明书上有流式图形的抗体，或者选择荧光素种类最多的克隆号的抗体
2）荧光素
可以登陆www.bdbiosciences.com/spetra，输入荧光素和检测的BD流式细胞仪机型及激发光，就可以查到相应的波长。
为什么要推荐使用AlexFluro488和AlexFluro647呢？
因为这些荧光非常明亮，对激光非常稳定，适合流式细胞仪的光谱性质，对PH值不敏感，具有水溶性。此外，他们联合使用时发射光谱存在巨大差异，无需补偿。
C、如果检测的指标数目超过了流式细胞仪的通道，怎么办？
如果需要做5个指标，而流式细胞仪只能做4个通道，首先将指标归成2类，再将样本分成2份，分别检测。比如需要同时检测CD3、CD4、CD8、IL-4和IFN-gamma，那么将样本分成两份，第1份加CD3、CD4、CD8和IL-4，而第2份加CD3、CD4、CD8和IFN-gamma。
二、同型对照（IsotypyControl）
1、为什么要用同型对照？
同型对照是使用与一抗相同种属来源、相同亚型、相同剂量和相同的免疫球蛋白及亚型的免疫球蛋白，用于消除由于抗体非特异性与细胞结合而产生的背景染色。同型对照是真正意思上的阴性对照，它不但可以用来设定流式细胞仪的电压，而且还可以帮忙省去昂贵与繁琐的重组细胞因子竞争封闭步骤。在流式细胞仪上样前，染色方式如下：
样本管：一抗＋样本
同型对照管：同型对照＋样本
2、如何选择同型对照？
一般选择与一抗的成分完全相同种属来源、相同亚型和亚链、相同荧光标记的抗体，比如抗人的CD56APC标记的抗体，货号是555518,成份是MouseIgG1,κ。那么它的同型对照应该是APC标记的MouseIgG1,κ，货号是555751。注意同型对照的成份跟它的名称是相同的.如果是抗体的组合形式是纯化的一抗＋荧光标记的二抗，那么应该选择一抗的同型对照。比如CDw125的纯化抗体，货号是555901，成分是MouseIgG1,κ。它的同型对照是纯化的MouseIgG1,κ，货号是555746。它的二抗PE标记的抗小鼠IgG1,货号是550083。那么染色方式如下：
样本管：纯化的CDw25＋PE标记的抗MouseIgG1＋样本
同型对照管：纯化的同型对照＋PE标记的抗MouseIgG1＋样本
如果没有找到适合的同型对照，在保持来源相同、荧光标记相同、免疫球蛋白类别相同条件下，那么优先选择的顺序应该是亚链不同－－亚型不同－－相同类别。比如，某种的抗体的来源是MouseIgG2а,κ。如果在同型对照表里面找到不到完全相同的同型对照，那么优先选择相同荧光标记的MouseIgG2а为同型对照。如果也没有找到MouseIgG2а，那么优先选择相同荧光标记的MouseIgG2b作为同型对照。如果最后还是没有找到MouseIgG2b，那么选者相同荧光标记的MouseIgG2作为同型对照。
3、如何查找同型对照？
同型对照在BD英文目录中或者BD网站上跟它对照的抗体的位置是一致的。BD目录中，抗人的抗体的同型对照都在HUMAN章节后面。抗小鼠的抗体的同型对照在MOUSE章节后面，非人类灵长类的抗体同型对照在NONHUMANPRIMATE章节后面。由于抗大鼠的抗体非常少，大部分抗体都是小鼠来源的，所以它的同型对照跟小鼠的一样，放在MOUSE章节后面。胞内细胞因子、趋化因子、补体、炎症介质及其受体的同型对照放在其章节的后面（注意：人的胞内细胞因子的同型对照跟人的表面标志的同型对照是不在一起的）。Phosflow的同型对照在Phosflow的介绍后面。比如，比如抗人的CD56APC标记的抗体，货号是555518，在06版BD目录的169页，成份是MouseIgG1,κ。那么它的同型对照应该是在HUMAN章节中MouseImmunoglobulinIsotype表格中，第191页，APC标记的MouseIgG1,κ，货号是555751。
4、哪些客户需要使用同型对照？
A对流式不是非常熟悉的客户。
B做胞内流式客户，比如胞内细胞因子、趋化因子和信号蛋白等。
C使用不常见的标志或者特异性不高的标志的客户，因为客户不熟悉不常见标志的表达情况，根据同型对照可以判断阳性细胞的位置。一些特异性不高的抗体，如多抗，非特异性结合非常多，使用同型对照可排除假阳性。
D对流式非常熟悉又使用常用的表面标志的客户一般可以不使用同型对照。
5、为什么有时候同型对照的表达会比抗体的表达高？
首先需要检查同型对照的抗体是否加错类型、剂量等。其次，因为有些标志在细胞的表面或者胞内表达不高，而跟其类似的抗原非常多，那么加入同型对照时，同型对照非特异性的结合会超过抗体的特异性，所以会造成这种现象，在细胞表面时如图所示。这个时候推荐使用其他阴性对照，如空白对照等。
三、补偿微球
流式细胞仪的荧光补偿隔一段时间之后需要调整到适合的位置。如果荧光补偿没有调节好，会导致细胞分群不明显或者流式检测得到的结果图非常不漂亮，而且会影响到检测结果的不真实。荧光补偿的调节对初学者来说非常不容易掌握，同时，补偿调节是流式细胞术中比较难掌握的操作。尤其是一些不常见的标志检测时，需要经验非常丰富的流式操作者根据多年的经验判断调节补偿，才可以得到比较好的数据和图片。那么，现在不需要这么麻烦。因为补偿微球让一切变得更简单。BDCompBeads是专用于流式细胞仪多色分析的荧光补偿调整微球。它的实用性是在于克服了以往普通的做三色以上的流式分析时补偿难调、耗费样本（往往用待测样本单标来进行补偿调节）的缺点。它本身不携带任何荧光，借助于与客户自己的特异性荧光抗体孵育结合来调节补偿。它不但能象待测的样本细胞一样在同样的实验条件下固定、破膜等，操作起来很简单，灵敏度高，一致性好，使补偿更轻松更准确，而且最难得的是它最适合于多色分析（如五色、六色、七色等）和复合荧光素（如PE-Cy7、APC-Cy7等），因为这时的补偿往往难度较大。各型号的流式仪器均能使用。Compbeads使用后可以将流式的条件保存，方便下次做同样的荧光染色搭配时参考用。
『伍』 可否用流式抗体来做免疫荧光用
我觉得你是想用荧光标记的抗NGF/COX-2抗体来做直接染色，这样的话可以在流式上试试。但是一般免疫荧光是用间接法，这样的话荧光抗体只anti某个种属的抗体（视一抗而定），不是anti NGF或COX-2的，这样就不能用于流式了。
如果一个抗体可以用来“做western blot，免疫荧光，免疫共沉淀,ELISA”，我估计着是HRP或碱性磷酸酶或生物素之类标记的，然后需要再加荧光标记的二抗，这类抗体也是不能做流式用的。
我只用过流式的抗体来做免疫荧光（直接染色），效果还不错，但是反过来就没试过。
『陆』 关于购买用于流式细胞技术的CD细胞抗体，有些地方看不懂
FITC 已经稀释好的可以用100次，按说明书加即可。
Purified 是冻干粉，需要自己买抗体稀释液稀释，但是价格相对便宜。
s/n 抗体稀释液
『柒』 什么是流式抗体
用于流式细胞仪检测的抗体,与之相对应的有免疫组化抗体,免疫荧光抗体等等
『捌』 流式分析一定要用专门的直标抗体吗
不一定能通用。你师姐用来做流式，是用直接标记，还是间接标记？如果是直接标记的话，那这个抗体一般不是FITC标记或者就是TRITC，PE之类的。如果恰好你的免疫组化，也是想用荧光素标记的抗体来直接标记，那就可以通用。如果你的免疫组化要用其它的标记的话，或者是间接标记的话，就有麻烦，因为荧光素的标记很可能会影响二抗和一抗的结合。
『玖』 流式抗体可以自己制作吗
可以啊，类似标记FITC和Biotin之类的。但就算是CD4和CD8这样这么常见的抗体，自行标记好，不仅使用的浓度需要比往常加倍，而且最后分群也没有公司的抗体好。 但唯一的好处就是，自行制作标记太省钱了，可能平时买一次公司的抗体钱用来自己做标记的话，估计这些自制抗体可以用到实验室关门了
『拾』 做流式细胞的抗体和做免疫组化需要的抗体是一样的吗
最好买写了免疫组化的做
不然没有信号
或者非特异性信号
你哪知道是抗体问题还是中间做的问题
而且做一次免疫组化还挺费事
要做就把东西准备好的